небольшие цитоплазматические фрагменты мегакариоцитов (мега = “большой”, карион = “ядро” и цит = “клетка”), которые происходят из плюрипотентных гемопоэтических стволовых клеток (рис. 2.1). Их также называют тромбоцитами - термин, используемый для обозначения аналогичных ядерных клеток у птиц, рептилий и амфибий. Тромбоциты млекопитающих имеют большинство из перечисленных ниже компонентов, хотя и имеют видовые различия:
A. Фосфолипидная мембрана, содержащая гликопротеины, важные для межклеточных взаимодействий, и фосфолипиды, важные для свертывания крови.
B. Открытая канальцевидная система мембранных инвагинаций, которая служит проводником для веществ, перемещающихся между тромбоцитами и плазмой, и которая способствует заметному увеличению площади внешней поверхности тромбоцитов после активации; она не развита у лошадей, крупного рогатого скота или верблюдов, чьи гранулы должны сливаться с клеточной мембраной для секреции.
C. Цитоскелет, связанный с периферическим кольцом микротрубочек и большим количеством актина и миозина, который поддерживает пластинки в дисковидной форме и позволяет изменять форму и формировать псевдоподии при активации.
D. Плотная канальцевая система эндоплазматического ретикулума, которая накапливает Ca2+ для активации тромбоцитов и которая важна для синтеза тромбоксана
E. α-гранулы, которые содержат многочисленные белки, участвующие в гемостазе и восстановлении сосудов, и содержимое которых секретируется при соответствующих стимулах.
F. Плотные гранулы, содержащие Ca2+, Mg2+, аденозиндифосфат, АТФ и серотонин, которые выделяются при соответствующих стимулах
G. Запасы гликогена и митохондрии для получения энергии

Процесс образования циркулирующих тромбоцитов из гемопоэтических стволовых клеток требует мегакариопоэза и тромбопоэза. Адекватный мегакариопоэз отражается в достаточном количестве мегакариоцитов в костном мозге, но не гарантирует адекватного тромбопоэза. (Производство тромбоцитов у птиц, рептилий и амфибий не связано с мегакариоцитами).

A. Мегакариопоэз, процесс пролиферации и созревания мегакариоцитов, происходит в кроветворной ткани, в основном в костном мозге, но часто также и в селезенке. Резидентные миелоидные клетки-предшественники реагируют на цитокины, в первую очередь Tpo (тромбопоэтин), пролиферацией, дифференцировкой и созреванием. Мегакариоциты увеличивают свою плоидность до 128n (128× гаплоидное число хромосом) и увеличивают объем цитоплазмы посредством повторных эндомитозов, представляющих собой митоз без клеточного деления или ядерной сегрегации через анафазу. В отсутствие Tpo наблюдается ограниченное базовое образование мегакариоцитов, что приводит к концентрации тромбоцитов 10–15% от нормы.

B. Тромбопоэз, образование тромбоцитов из мегакариоцитов и их доставка в кровоток, по-видимому, не зависит от Tpo, но Tpo является основным регулятором продукции тромбоцитов благодаря своему влиянию на мегакариопоэз. Один мегакариоцит производит тысячи тромбоцитов.
1. В костном мозге мегакариоциты начинают развиваться в остеобластической (эндостальной) нише, а затем мигрируют в сосудистую нишу (перисинусоидальную), чтобы завершить свое созревание. Каждое микроокружение создается различными молекулами матрикса и цитокинами, вырабатываемыми местными остеобластами, эндотелиальными клетками, фибробластами, адипоцитами, макрофагами, мегакариоцитами и другими клетками.
2. CXCL12 (фактор роста стромальных клеток 1) и фактор роста фибробластов 4 - это два хемокина, вырабатываемые клетками костного мозга, которые связываются с рецепторами клеток линии мегакариоцитов и помогают направлять их в сосудистую нишу, где они взаимодействуют с эндотелиальными клетками.
3. Как только мегакариоциты созревают, они протягивают псевдоподии, также называемые пропластинками, через эндотелиальные клетки или между ними в ответ на высокие концентрации сфингозин-1-фосфата в сосудах. Псевдоподии удлиняются и разделяются на цепочки взаимосвязанных цитоплазматических шариков, которые высвобождаются в виде тромбоцитов в синусоидах костного мозга или в кровотоке после того, как тромбоциты высвобождаются из своих родительских мегакариоцитов. Некоторые целые мегакариоциты попадают в синусоидальную кровь и застревают в легких, в первых же мелких сосудах, с которыми они сталкиваются (рис. 4.1).
4. Легкие, по-видимому, играют важную роль в тромбопоэзе. По некоторым данным, более 50 % тромбоцитов образуются из мегакариоцитов и пропластков, задержанных в легких. Турбулентный кровоток и специфические взаимодействия между стенками сосудов и мегакариоцитами или их пропластками способствуют образованию тромбоцитов. Легкие содержат популяции внутрисосудистых и внесосудистых мегакариоцитов. Происхождение внесосудистых мегакариоцитов неизвестно (костный мозг или местные стволовые клетки), и эта популяция может функционировать скорее как иммунорегуляторные клетки, чем как фабрики тромбоцитов.
5. В меньшей степени при нормальном состоянии здоровья и в большей степени при патологических состояниях с повышенной стимуляцией тромбопоэза мегакариоциты могут высвобождать тромбоциты путем быстрой фрагментации цитоплазмы без образования пропластоцитов.

C. Tpo (тромбопоэтин) вырабатывается в основном гепатоцитами, но при определенных состояниях другие клетки, такие как остеобласты, могут вырабатывать Tpo. Tpo опосредует свои эффекты через рецептор Tpo (CD110), который часто называют c-mpl, поскольку он является протоонкогеном, связанным с онкогеном вируса миелопролиферативного лейкоза мышей; этот рецептор был открыт до того, как Тпо был идентифицирован как его лиганд. Рецептор экспрессируется на клетках линии мегакариоцитов, включая тромбоциты, и на гемопоэтических стволовых клетках.
1. Хотя долгое время считалось, что выработка Tpo гепатоцитами является определяющим фактором, а уровень Тпо в плазме крови регулируется в основном общей массой тромбоцитов/мегакариоцитов, есть также доказательства того, что синтез Tpo в здоровом организме регулируется удалением стареющих тромбоцитов печенью посредством взаимодействия с рецепторами эндоцитарного азиалогликопротеина, называемыми рецепторами Эшвелла-Морелла, и с лектином галактозы макрофагов на клетках Купфера. С возрастом тромбоцитов дегликозилирование (десиалилирование, удаление сиаловой кислоты) поверхностных белков тромбоцитов (например, гликопротеина 1b) позволяет им распознаваться этими рецепторами на гепатоцитах или клетках Купфера, и было показано, что десиалилированные тромбоциты накапливаются в клетках Купфера. Неясно, способствует ли апоптоз тромбоцитов к дегликозилированию, но это возможно. Клиренс тромбоцитов по этому пути вызывает управляемое рецепторами увеличение синтеза и высвобождения Тпо в гепатоцитах, тем самым способствуя мегакариопоэз.
2. Общая масса тромбоцитов плюс мегакариоцитов может способствовать регуляции уровня Tpo в плазме крови посредством опосредованного рецепторами поглощения Тпо, при этом существует обратная зависимость между [тромбоцитами] и [Tpo] крови и костного мозга.
a. При тромбоцитозе больше Тпо связывается с рецепторами и выводится из кровообращения, поэтому стимуляция мегакариоцитов или стволовых клеток происходит в меньшей степени.
b. При тромбоцитопении больше Tpo остается несвязанным и доступно для стимуляции мегакариоцитов. Однако, когда гиперплазия мегакариоцитов сопровождается тромбоцитопенией, мегакариоцитами связывается больше Tpo, и, таким образом, уровень [Tpo] в плазме ниже, чем ожидалось, исходя исключительно из [тромбоцитов].
3. Tpo способствует гиперплазии мегакариоцитов (мегакариопоэзу), что приводит к последующему тромбопоэзу в костном мозге, селезенке и легких. Tpo в печени имеет решающее значение для размножения гемопоэтических стволовых клеток, их выживания или того и другого.

D.  Молодые тромбоциты: по крайней мере, некоторые новообразованные тромбоциты содержат повышенное количество РНК, как и молодые эритроциты (ретикулоциты); их также называют ретикулярными тромбоцитами. Возраст ретикулярных тромбоцитов у собак составляет менее 24 часов, и их исследовали в образцах крови для оценки тромбопоэза у собак и лошадей. Ретикулярные тромбоциты не обязательно крупные, но тромбоциты, образующиеся в состоянии стимулированного тромбопоэза, обычно крупные («стрессовые тромбоциты»).

A. Состав крови [тромбоцитов] обычно определяется относительными скоростями производства, потребления и разрушения тромбоцитов, а также перемещением тромбоцитов в кровоток и из него (рис. 4.2).
B. На выработку тромбоцитов в основном влияет степень стимуляции цитокинами и количество реагирующих клеток. У грызунов и людей общее время созревания мегакариоцитов составляет от 2 до 10 дней.
C. Продолжительность жизни тромбоцитов различается у разных видов и в здоровом состоянии составляет около 5–10 дней.
D.  Расход тромбоцитов продолжается в связи с постоянным восстановлением мелких сосудистых дефектов. Этот расход не является основным фактором, определяющим продолжительность жизни тромбоцитов, однако средняя продолжительность жизни тромбоцитов сокращается при любом выраженном тромбоцитопении, даже если тромбоцитопения вызвана снижением их продукции. Это обусловлено постоянной потребностью в тромбоцитах для поддержания целостности сосудов; при выраженной тромбоцитопении значительно больший процент циркулирующих тромбоцитов расходуется в ходе планового поддержания.
E. В здоровом состоянии продолжительность жизни тромбоцитов, по-видимому, в значительной степени определяется печеночным клиренсом стареющих тромбоцитов с десиалилированными поверхностными белками и/или апоптотическими изменениями, которые могут включать десиалилированные поверхностные белки и экспрессию фосфатидилсерина. Апоптоз тромбоцитов (и, следовательно, продолжительность их жизни) зависит от баланса между проапоптотическими (Bax) и антиапоптотическими (Bcl-xL) молекулами внутреннего (митохондриального) пути апоптоза. Фармакологические ингибиторы Bcl-xL вызывают апоптоз тромбоцитов и тромбоцитопению, опосредуемые главным образом печенью. Однако в предыдущих исследованиях у собак со спленэктомией продолжительность жизни тромбоцитов была почти на 50% больше (8 дней), чем у здоровых собак без спленэктомии (около 5-6 дней), что подтверждает роль селезенки в определении продолжительности жизни тромбоцитов.
F. Было показано, что селезенки человека и кролика содержат около 33% тромбоцитов в любой момент времени. Адреналин и сокращение селезенки мобилизуют эти тромбоциты в кровоток, в то время как застой крови в селезенке задерживает большее их количество. Депонирование и мобилизация тромбоцитов в селезенке ожидаются и у других видов. Однако через 5 минут после введения фенилэфрина для индукции сокращения селезенки у лошадей наблюдалось значительное увеличение Hct (увеличивалось со среднего значения 38% до 50%) без увеличения [тромбоцитов].

А. Основная функция тромбоцитов - способствовать восстановлению поврежденных сосудов и предотвращать кровотечение, участвуя в образовании гемостатических пробок, содержащих агрегированные тромбоциты. Тромбоциты расходуются в этом непрерывном процессе.

В. Энергия для функционирования тромбоцитов поступает из АТФ, образующегося в результате аэробного гликолиза и окислительного фосфорилирования. Глюкоза поступает в тромбоциты путем облегченной диффузии (переносчики глютена).

C. Негемостатические функции тромбоцитов: Тромбоциты играют важную роль в воспалении, иммунитете, заживлении ран и раке, некоторые из которых усугубляют заболевание. Они воздействуют на другие клетки посредством прямого контакта, образования микрочастиц или высвобождения многочисленных запасенных или вновь синтезированных биологически активных молекул, включая провоспалительные медиаторы, цитокины, митогены и факторы роста. Они взаимодействуют с лейкоцитами и эндотелием, способствуя трансэндотелиальной миграции и рекрутированию лейкоцитов, образованию нейтрофильных внеклеточных ловушек (NET) и активации дендритных клеток и Т-лимфоцитов. Они являются антигенпрезентирующими клетками. Они способствуют гибели организмов за счет высвобождения микробиоцидных веществ, фагоцитоза и выведения бактерий из кровотока. Связывание бактериального липополисахарида с толл-подобными рецепторами тромбоцитов может вызвать высвобождение веществ, которые рекрутируют воспалительные клетки. Тромбоциты также способствуют ангиогенезу, как при заживлении ран, так и при новообразованиях, а также способствуют росту рака и метастазированию.

Количественные и качественные данные гемограммы или общего анализа крови, относящиеся к тромбоцитам (тромбоцитам); см. Приложение А для получения основных концепций, касающихся оценки тромбоцитов в общем анализе крови и мазке крови.

A. Оценка мазка крови
1. Микроскопическая оценка тромбоцитов в окрашенном мазке крови является важной частью тромбограммы, особенно у пациентов с кровотечением или при тромбоцитопении или выраженном тромбоцитозе.
2. Она служит трём основным целям:
a. Позволяет обнаружить скопления тромбоцитов, которые могут ложно занижать концентрацию тромбоцитов и ложно повышать концентрацию лейкоцитов. Некоторые анализаторы обнаруживают и сообщают о наличии некоторых скоплений тромбоцитов, а другие — нет.
b. Позволяет оценить концентрацию тромбоцитов для подтверждения автоматизированных значений или в случаях, когда автоматизированные измерения недоступны или ненадежны.
c. Позволяет оценить тромбоциты на наличие аномальных признаков.

B. Концентрация тромбоцитов
1. Концентрация тромбоцитов — это количество тромбоцитов в единице объёма крови (на медицинском жаргоне обычно называется количеством тромбоцитов, но количество тромбоцитов используется для расчёта концентрации тромбоцитов).
2. Перевод единиц измерения: (# × 103/мкл) × 106 мкл/л = # × 109/л (единица СИ)

C. MPV
1. MPV — это средний кажущийся объем всех частиц в образце крови, которые считаются отдельными тромбоцитами, независимо от того, являются ли частицы тромбоцитами или нет, и находятся ли они по отдельности или в небольшом скоплении.
2. Некоторые анализаторы дополнительно отображают долю обнаруженных крупных тромбоцитов, например, процент крупных тромбоцитов (ADVIA) или соотношение крупных клеток тромбоцитов (P-LCR, Sysmex), используя значения отсечки 12 или 20 % соответственно.
3. Единица измерения MPV: fL (мкм3)

D. PDW
1. PDW - это оценка анизоцитоза тромбоцитов (изменения объема), рассчитанная на основе распределения объемов отдельных тромбоцитов.
2. Единицы измерения: % (ADVIA) или fL (Sysmex)
E. Pct (тромбокрит): тромбоциты плюс -crit (от krinein, что означает “отделять”)
1. Pct, как и Hct, представляет собой процентную долю объема крови, заполненной тромбоцитами (обычно < 0,5 % в норме). Хотя его часто называют массой тромбоцитов, он не является мерой массы и не выражается в единицах массы; как концентрация, а не масса, он может изменяться в зависимости от уменьшения или увеличения объема плазмы, не связанного с общим количеством или массой тромбоцитов в крови.
2. Единицы измерения: % или десятичная форма (L/L или без единиц измерения)

F. MPC и PCDW
1. MPC – это расчетная концентрация, генерируемая анализаторами ADVIA на основе измеренного показателя преломления тромбоцитов (светорассеяние отдельных тромбоцитов 5–15) и показателей преломления H₂O, белков, углеводов и липидов. Она отражает плотность тромбоцитов. При активации и секреции содержимого гранул MPC уменьшается вместе с плотностью тромбоцитов, показателем преломления и светорассеянием под большими углами.
2. PCDW (или средняя ширина распределения концентрации компонентов тромбоцитов) – это вариация показателя преломления тромбоцитов, рассчитанная на основе стандартного отклонения гистограммы показателя преломления. Увеличение может отражать меньшую сферизацию тромбоцитов, вызванную буферным раствором, и, следовательно, большую вариацию рассеяния, связанную с изменением ориентации тромбоцитов в лазерном луче.
3. Единицы измерения: г/дл или г/л (единица СИ).

G. Анализаторы могут помечать наличие скоплений тромбоцитов, но значительное скопление тромбоцитов может присутствовать и без пометки образцов, и эти сигналы могут срабатывать, когда скопления тромбоцитов не обнаруживаются в мазках, например, при липемии. При оценке любых автоматизированных данных по тромбоцитам рекомендуется проводить оценку мазков.

1. Антикоагуляция венозной крови ЭДТА является рутинной процедурой для общего анализа крови (см. Приложение А).
a. Можно использовать цитратную венозную кровь (1 часть цитрата на 9 частей крови) (например, при подозрении на слипание тромбоцитов, вызванное ЭДТА), но это может повлиять на [тромбоциты] и некоторые индексы тромбоцитов (см. специальные тесты). Разведение цитрата требует корректировки измеренного [тромбоцитов] (скорректированное [тромбоциты] = измеренное [тромбоциты] × 1,1).
b. Гепаринизированные образцы не рекомендуются, поскольку слипание тромбоцитов часто происходит при антикоагуляции гепарином.

2. В идеальном образце отсутствуют агрегации тромбоцитов, но агрегация тромбоцитов встречается часто. Аггрегация тромбоцитов — это общий термин, охватывающий пассивную агглютинацию и обратимую или необратимую активную агрегацию. В ветеринарии считается, что в большинстве случаев агрегация тромбоцитов обусловлена агрегацией, вызванной активацией. Необходимость минимизации активации тромбоцитов во время флеботомии и обработки образцов, возможно, не будет полностью оценена без достаточного опыта проведения различных тестов на функцию тромбоцитов.

3. Тромбоциты могут быть легко активированы во время взятия крови, и активация вызывает слипание и другие изменения, которые влияют на параметры тромбоцитов (например, MPV, MPC). Тромбоциты могут слипаться из-за их гиперактивности, из-за медленной или некачественной техники венопункции, а также из-за несвоевременного или неадекватного смешивания крови и антикоагулянта. Чистая венопункция крупной вены (например, яремной вены) с забором образцов непосредственно в вакуумную пробирку, скорее всего, позволит получить образцы без значительного скопления тромбоцитов. Набирание в шприц с последующим переносом в пробирку увеличивает вероятность активации тромбоцитов и их слипания. Тромбоциты кошек и крупного рогатого скота очень склонны к слипанию при обычных методах сбора. Тот факт, что значение RI равно WRI при наличии скоплений тромбоцитов, не означает, что оно является точным, поскольку RI является широким, и у животного действительно может быть тромбоцитоз. Чем больше количество крупных скоплений тромбоцитов на размытом краю мазка крови, тем больше вероятность того, что анализатор [тромбоцитов] ошибочно снизит их уровень до клинически значимой степени. Однако универсальных рекомендаций по определению этого показателя не существует, отчасти потому, что степень слипания тромбоцитов в одном мазке крови не полностью отражает степень слипания тромбоцитов в остальной части образца.

4. Ингибитор тромбоцитов простагландин Е1 (PgE1) или более стабильный ингибитор илопрост, синтетический аналог простациклина (PgI2), можно использовать в очень небольших объемах жидкости для подавления активации тромбоцитов и, следовательно, образования тромбоцитарных сгустков. Полученные данные свидетельствуют о более эффективном ингибировании образования тромбоцитов, когда тромбоциты быстро контактируют с ингибиторами (например, при введении ингибиторов в пробирку с ЭДТА при поступлении крови). Использование этих ингибиторов в большинстве случаев нецелесообразно.

5. Пробирки для взятия крови, содержащие цитрат, теофиллин, аденозин и дипиридамол (CTAD-пробирки), содержат факторы ингибирования тромбоцитов, которые помогают снизить активацию тромбоцитов in vitro. Они могут быть особенно полезны для кошек. Даже добавление ЭДТА-антикоагулянтной крови в пробирки, содержащие CTAD, сразу после взятия крови, уменьшало слипание тромбоцитов и его влияние на [тромбоцитарную систему] у кошек.

6. Добавление амикацина в пробирки с ЭДТА перед забором крови уменьшало слипание тромбоцитов в образцах крови кошек. При добавлении после сбора к образцам крови, содержащим сгустки тромбоцитов, антикоагулянтов, содержащих ЭДТА, количество сгустков уменьшилось, а концентрация тромбоцитов увеличилась в среднем на 134 % для образцов кошачьей крови и на 32 % для образцов собачьей крови; единственным другим обнаруженным изменением было незначительное увеличение среднего объема эритроцитов. Насколько точно концентрация тромбоцитов в образцах, обработанных амикацином, соответствовала фактической концентрации тромбоцитов, не оценивалось. Механизм действия амикацина неизвестен.

1. Цитратные антикоагулянты вызвали ложное снижение количества [тромбоцитов], связанное с активацией тромбоцитов.
a. Ранее компания Becton Dickinson прекратила производство цитратных пробирок с частичной вытяжкой (меньший вакуум и большее пространство для пробирок стандартного размера), поскольку использование таких пробирок было связано с активацией тромбоцитов во время заполнения пробирок, что, в свою очередь, могло привести к ложному снижению концентрации тромбоцитов и изменению времени частичной свертываемости тромбопластина в пробирках стандартного размера. образцы, взятые у пациентов, получавших гепарин.
б. В одном исследовании на собаках с новообразованиями, у которых образцы были взяты шприцем и перенесены в пробирки с цитратом (вместо того, чтобы их забирали непосредственно в вакуумные пробирки), уровень тромбоцитов был стабильно низким и, по-видимому, был связан с активацией тромбоцитов и их слипанием. Это могло произойти во время сбора и переливания крови, поскольку цитрат, как правило, является отличным антикоагулянтом для использования в исследованиях функции тромбоцитов.

2. При использовании всех методов количественного определения тромбоцитов должно отсутствовать их слипание, чтобы быть уверенным в точности определения [тромбоцитов]. Это лучше всего определить путем анализа мазка крови, взятого из образца во время анализа концентрации тромбоцитов. При наличии скоплений тромбоцитов значения, измеренные большинством анализаторов, можно обоснованно считать минимальными, поскольку подсчитываются только отдельные тромбоциты, а скопления, по-видимому, не распадаются настолько, чтобы значительно увеличить количество [тромбоцитов] в анализаторе. Хотя легкое слипание, вероятно, оказывает незначительное клинически значимое влияние на [тромбоциты], универсального определения того, что представляет собой легкое слипание, не существует. Если требуются точные значения (например, для подтверждения очевидного снижения), следует взять новый образец таким образом, чтобы свести к минимуму активацию тромбоцитов и, следовательно, их слипание (см. раздел II.C "Коагуляция" в главе 5).

3. Существуют различные утверждения относительно стабильности концентраций тромбоцитов. Средние концентрации в группах исследованных образцов кажутся достаточно стабильными в течение 8 часов при комнатной температуре и в течение 24 часов при температуре 4°C. Однако концентрации могут значительно увеличиваться или уменьшаться в отдельных образцах, поэтому рекомендуется провести своевременное тестирование. При хранении при комнатной температуре может наблюдаться незначительное или умеренное снижение содержания собачьих [тромбоцитов] через 24 часа и даже более значительное - через 48 часов.

4. Оценка содержания тромбоцитов в мазке крови
a. Приблизительные концентрации тромбоцитов могут быть рассчитаны на основе оценки среднего количества тромбоцитов на 1000× поле по крайней мере в 5 (предпочтительно в 10) соответствующих полях (см. Приложение А) с использованием соответствующего коэффициента пересчета: 1 тромбоцит/1000× поле = 15 000-20 000 тромбоцитов/мкл.40 Например, если среднее число тромбоцитов на 1000× поле равно 4, то расчетное количество [тромбоцитов] будет варьироваться от примерно 4 × 15 000 тромбоцитов/мкл = 60 000 тромбоцитов/мкл до примерно 4 × 20 000 тромбоцитов/МКЛ = 80 000 тромбоцитов/мкл. Таким образом, можно распознать тромбоцитопению от умеренной до выраженной и тромбоцитемию от умеренной до выраженной (рис. 4.3).
(1) Площадь, представленная полем зрения размером 1000× микроскопа, зависит от оптики микроскопов. Диаметр поля зрения напрямую зависит от количества полей зрения в окулярах. Из-за этого меняется соответствующий коэффициент преобразования. Соотношение 1:20 000 больше подходит для обычных окуляров, а соотношение 1:15 000 больше подходит для широкоугольных (22 мм) окуляров. И то, и другое дает полезную оценку. В лаборатории одного из авторов (MAS) 15 клинических патологоанатомов, ординаторов или технологов лаборатории использовали широкопольные микроскопы для оценки концентрации тромбоцитов в восьми образцах крови с диапазоном концентраций тромбоцитов от < 20 000/мкл до > 1 000 000/мкл; результирующий эмпирический коэффициент пересчета составил около 14 000/мкл для этой группы.
(2) Расчетное значение [тромбоцитов] следует сравнить с видоспецифичными RIS для интерпретации. Чтобы исключить тромбоцитопению, у собак (большинства пород), кошек и крупного рогатого скота, как правило, должно быть не менее 8-10 тромбоцитов на 1000× поле зрения (22 мм на глаз), а у большинства лошадей (и борзых) должно быть не менее 5 тромбоцитов на 1000× поле зрения. Для борзых необходимы рекомендации, относящиеся к конкретной породе (нижний предел для борзых ниже, чем для большинства собак, и аналогичен таковому для большинства лошадей), и они могут потребоваться для других пород, например, исландских лошадей.
(3) Если оцениваемые участки слишком плотные, [количество тромбоцитов] будет завышено. Это происходит, например, при получении мазков от животных с анемией, для которых могут быть оценены участки, расположенные глубже в теле. В этих областях плотность эритроцитов может выглядеть адекватной из-за анемии, но толщина мазка больше, поэтому на одно поле было бы отложено больше тромбоцитов.
б. Другой метод оценки [количества тромбоцитов] заключается в определении соотношения тромбоцитов к эритроцитам или лейкоцитам в нескольких полях, а затем вычислении предполагаемого количества [тромбоцитов] либо по концентрации эритроцитов, либо по концентрации лейкоцитов (например, для 5 тромбоцитов на лейкоцитоз и [количества лейкоцитов], равного 20 000/мкл, расчетное количество [количества тромбоцитов] в крови составляет [тромбоцит] = 5 × 20 000/мкл = 100 000/мкл). Эти методы требуют количественного определения концентрации эритроцитов или лейкоцитов в крови.
c. При оценке [количества тромбоцитов] по мазкам крови следует учитывать слипание тромбоцитов. При наличии [тромбоцитов] оценка или измеренный уровень [тромбоцитов] могут быть неточными, незначительными при незначительном слипании и заметными при наличии крупных сгустков и/или микросгустков.

5. Импедансные методы (основные принципы и анализаторы приведены в главе 2 и на рисунке 2.4)
a. Как правило, [уровень тромбоцитов] измеряется тем же способом, что и параметры эритроцитов, и представляет собой концентрацию частиц, которые находятся в пределах определенного интервала объема частиц (например, 2-30 мкм), основанного на увеличении электрического сопротивления при прохождении через узкое отверстие.
б. Для большинства образцов правильно настроенный и откалиброванный импедансный счетчик клеток обеспечивает надежную концентрацию тромбоцитов у большинства собак, лошадей и крупного рогатого скота, но не у кошек.
c. Импеданс может не отличать мелкие эритроциты от тромбоцитов (например, при дефиците железа) или крупные тромбоциты от эритроцитов (например, у многих кошек или собак с макротромбоцитопенией). У кошек больше вариабельность объема тромбоцитов и они более крупные, чем у других видов, поэтому импедансные методы являются проблематичными для точного определения [тромбоцитов] у кошек.

6. Методы работы с оптическими проточными ячейками (основные принципы и анализаторы приведены в главе 2 и на рисунке 2.5)
a. Рассеяние света (например, анализаторы ADVIA): Малоугловое (например, 2-3) рассеяние света отдельными клетками пропорционально объему клеток и может использоваться для идентификации тромбоцитов и определения их размера, но одноугловое рассеяние света не позволяет различать различные типы частиц одинакового размера (например, Фрагменты эритроцитов и тромбоциты). Анализаторы ADVIA используют теорию Ми о рассеянии света однородными сферами для анализа эритроцитов и тромбоцитов.
(1) Эритроциты, которые внутренне гомогенны, изоволюмометрически сферизованы разбавляющей жидкостью. После воздействия ЭДТА в течение 20-30 минут тромбоциты приобретают сфероидальную форму и кажутся достаточно однородными для большинства анализов.
(2) Согласно теории рассеяния Ми, рассеяние фиксированного пучка света, направленного на однородные сферы, определяется объемом ячейки и комплексным показателем преломления. Показатель преломления пропорционален содержанию и плотности клеток и в эритроцитах больше, чем в тромбоцитах; его можно оценить по степени рассеяния света под большим углом (5-15 градусов). При усилении сигналов рассеяния тромбоцитов комбинация малоуглового (объемного) и высокоуглового (показатель преломления) рассеяния используется для формирования карты объема/показателя преломления, которая определяет каждую клетку и помогает отличить тромбоциты от обломков, фрагментов эритроцитов и клеток-призраков эритроцитов. Количество частиц размером 1-60 мкм, характеризуемых как тромбоциты, в данном объеме жидкости равно [тромбоциту].
(3) Это повышает точность определения [тромбоцитов] по сравнению с импедансными или оптическими методами с однократным рассеянием, особенно в образцах с тромбоцитопенией, где доля мешающих частиц выше. Однако некоторые частицы, включая фрагменты клеток, призрачные эритроциты и некоторые липидные капли, могут подобным образом рассеивать свет и приниматься за тромбоциты, что приводит к ложному увеличению количества [тромбоцитов].
b. Флуоресцентный (например, анализаторы Sysmex): Флуоресцентный краситель окрашивает нуклеиновые кислоты в тромбоцитах и других клетках, а свойства флуоресценции и рассеяния света используются для распознавания тромбоцитов. Sysmex XN-V определяет концентрацию тромбоцитов импедансным, оптическим и оптико-флуоресцентным методами, используя для флуоресценции краситель на основе оксазина.

7. QBC (основные принципы приведены в главе 2 и на рисунке 2.6)
a. QBC определяет толщину клеточного слоя над слоем лимфоцитов и моноцитов, который обладает характерной флуоресценцией РНК или липопротеина. Толщина этого слоя (по сути, Pct) пересчитывается в [тромбоциты] на основе корреляционных исследований с другими анализаторами, но формула пересчета является запатентованной. При использовании с кошачьими образцами наблюдалась высокая точность, и часто встречались аналитические флажки.
б. Поскольку на это значение влияет объем тромбоцитов, оно не всегда может соответствовать концентрации тромбоцитов, полученной другими методами.
c. Небольшие скопления тромбоцитов в меньшей степени влияют на аналитический метод, чем импедансные методы, но возникают относительно незначительные ложные повышения или понижения.

8. Гемоцитометр (основные принципы приведены в главе 2 и на рисунках 2.3 и 21.3)
a. Этот ручной метод является относительно трудоемким и обладает гораздо меньшей точностью, чем большинство автоматизированных методов, но он подходит для большинства диагностических целей и может быть предпочтительным при наличии большого количества гигантских тромбоцитов (превышающих пороговый размер тромбоцитов, установленный анализатором).
б. Тромбоциты подсчитываются микроскопически в определенных областях сетки после разбавления образца и лизиса эритроцитов. Как и при любом другом методе, слипание тромбоцитов препятствует точному измерению [количества тромбоцитов], но при наличии слипаний результаты могут быть более точными, чем при использовании автоматизированных методов. Другие параметры тромбоцитов не оцениваются.

1. Как правило, оптические анализаторы оценивают прямое или малоугловое (например, 2-3) рассеяние света, генерируемое каждой частицей, идентифицированной как тромбоцит, и преобразуют сигнал в показатель объема; большее обнаружение прямого рассеяния света соответствует более крупному тромбоциту. Хотя на разброс под низким углом в основном влияет объем ячейки, на разброс под низким углом также влияет внутренний показатель преломления, который в первую очередь определяется разброс под высоким углом, поэтому оценка под обоими углами рассеяния, как это делается с помощью анализаторов ADVIA, может обеспечить более точное измерение объема.

2. Методы импеданса преобразуют увеличение импеданса, вызванное прохождением каждого тромбоцита через отверстие, расположенное между двумя электродами, в меру объема; большее сопротивление соответствует большему тромбоциту.

3. MPV также может быть рассчитан как частное от Pct, деленное на концентрацию тромбоцитов и скорректированное на единицы измерения (см. соотношение в уравнении 4.1a).

4. Тромбоциты не участвуют в MPV, если их количество превышает верхний порог для тромбоцитов, как по отдельности, так и в виде скоплений. Более крупные тромбоциты исключаются импедансными методами, чем оптическими, но разбавляющие жидкости, используемые для придания тромбоцитам сферической формы в оптических анализаторах, могут ложно снижать MPV4.

5. На MPV влияют антикоагулянты, температура хранения пробы и время хранения образца. Эти переменные обычно оказывают относительно незначительное влияние (разница менее 20%), но это влияние следует учитывать при интерпретации значений, особенно для значений, близких к верхнему или нижнему контрольному пределу. Также могут быть затронуты другие параметры тромбоцитов, такие как Pct, PDW и доля крупных тромбоцитов.
a. Антикоагулянт: обычно используется ЭДТА. Хотя тромбоциты в образцах с ЭДТА претерпевают незначительные изменения при активации, одно из изменений заключается в том, что они становятся более сфероидальными; это преимущество анализа ADVIA заключается в том, что метод ADVIA MPV предполагает использование сферических клеток и эритроцитов с буферными сферами ADVIA, но не тромбоцитов. Хотя ЭДТА способствует изменению сфероидной формы тромбоцитов, при тестировании они могут не иметь сферической формы, что приводит к неточностям в определении MPV. Частично это зависит от времени воздействия. По сравнению с ЭДТА, цитрат лучше сохраняет дисковидную форму тромбоцитов (в цитратизированной крови они сворачиваются меньше и медленнее), что приводит к ложно завышенным значениям MPV по методу ADVIA.
b. Время хранения: При измерении импеданса и пробах, содержащих ЭДТА-антикоагулянты, в течение 5 минут происходило зависящее от времени искусственное увеличение (обычно оно не распознается из-за задержек с тестированием) и могло привести к получению значений в течение 3 часов, которые составляли 150 % от исходного уровня.46,50 В одном исследовании увеличение составило около 15 %. через 24 часа по сравнению с результатами, полученными в течение 2 часов после взятия крови.38 При оптических измерениях на анализаторе ADVIA значения, как правило, увеличивались через 24 часа и еще больше - через 48 часов (при хранении при комнатной температуре), но MPV в некоторых образцах незначительно снижался. В других исследованиях сообщалось как об увеличении, так и об уменьшении дозы.
c. Температура хранения: Сообщается о повышении MPV при комнатной температуре или хранении в холодильнике, но при температуре 4°C изменения могут быть более медленными.

1. Для анализаторов ADVIA PDW рассчитывается как стандартное отклонение распределения объемов тромбоцитов и указывается в процентах (%) от MPV, т.е. 100 × (стандартное отклонение MPV)/MPV.
2. Для некоторых анализаторов при расчете не учитывается определенная доля самых крупных и самых мелких тромбоцитов. Например, учитывая, что пик кривой распределения объема равен 100 %, разница (в fL) между высоким и низким объемами тромбоцитов на уровне 20 % от высоты пика составляет PDW в некоторых анализаторах Sysmex.
3. Если крупные тромбоциты исключены из анализа или если тромбоциты слиплись, то PDW не является надежным.

1. Pct измеряется не так, как обычный Hct, а рассчитывается на основе MPV и [тромбоцитов]. Таким образом, отклонения или ошибки в любом из этих измерений (обычно из-за скопления тромбоцитов) влияют на Pct (см. уравнение 4.1).

(4.1a)
Pct = MPV × тромбоцит
При MPV 10 fL и количестве тромбоцитов 300 000 μL,
Pct = 10 fL × 300 000 μL = 3 000 000 фл μL = 0,003 мкл μL = 0,3%

(4.1b)
Если количество тромбоцитов указано в единицах × 10³ μL или × 10⁹ л, например, 300 × 10⁹ л, то
Pct (%) = MPV (fL) × тромбоциты / 10 000
Пример: Pct = 10 × 300 / 10 000 = 3000 / 10 000 = 0,3%

2. QBC VetAutoread рассчитывает концентрацию тромбоцитов на основе измеренного Pct,
но вместо того, чтобы сообщать значение Pct, толщина слоя пересчитывается по запатентованной формуле в концентрацию тромбоцитов.
3. В одном исследовании с использованием ADVIA показатель Pct имел тенденцию к снижению через 24 часа и более выраженному через 48 часов при хранении образцов при комнатной температуре, но некоторые значения несколько увеличились.

1. Поскольку MPC основан на рассеянии света и предположении о сферичности (или почти сферичности) клеток, если клетки не имеют адекватной сферичности, MPC ложно занижен. Это может наблюдаться с некоторыми образцами ЭДТА, особенно при анализе вскоре после сбора, а также с цитратными образцами. Снижение MPC при повышенном MPV может отражать активацию тромбоцитов или недостаточное сферирование.
2. MPC рассчитывается на основе среднего показателя преломления клеток, идентифицированных как тромбоциты: MPC (г/дл) = (средний показатель преломления – 1,333) / 0,0018 дл/г, где 1,333 – показатель преломления H₂O, а 0,0018 считается средним приростом показателя преломления, вызванным каждым г/дл типичных пропорций компонентов тромбоцитов, включая белки, липиды и углеводы. Таким образом, показатель преломления каждого тромбоцита дает оценку г/дл компонентов этого тромбоцита, не являющихся H₂O (его тромбоцитарного компонента). Гистограмма показателя преломления содержит результаты для отдельных тромбоцитов, среднее значение которых отражает среднюю концентрацию цитоплазматических компонентов тромбоцитов (MPC). Это аналогично тому, как CHCM является средней концентрацией Hgb в эритроцитах.
3. Было показано, что увеличение и уменьшение MPC напрямую коррелируют с плотностью тромбоцитов, что подтверждается разделением в градиенте плотности центрифугированием.
4. PCDW и визуальный осмотр диаграммы рассеивания объёма тромбоцитов/показателя преломления можно использовать для оценки адекватности сферизации тромбоцитов; сферизация может быть недостаточной, если PCDW > 5,5 г/дл и тромбоциты рассеяны диффузно.
5. MPC также используется для расчета так называемого MPM, который приблизительно соответствует сухой массе среднего тромбоцита в образце. MPM (pg) — это произведение MPC (г/дл) и MPV (fL), делённое на 100 для коррекции единиц объёма. MPM аналогичен MCH, средней массе (pg) Hgb на эритроцит. Как и в случае с MCH, набухание или усадка клеток должны оказывать ограниченное влияние на общую сухую массу каждой клетки. Считается, что эта масса отражает функциональный потенциал тромбоцитов, поскольку сухая масса коррелирует с содержанием гранул.

A. В хороших мазках оптимально собранной и обработанной крови тромбоциты присутствуют по отдельности, лишь немногие из них соприкасаются друг с другом, если только нет выраженного тромбоцитоза. Однако часто встречаются скопления тромбоцитов, содержащие от 2–3 до > 100 тромбоцитов (рис. 4.4).
B. Сгустки обычно возникают в результате активации тромбоцитов in vitro (травматическая венепункции или отсроченный контакт с ЭДТА), но сообщалось об агглютинации тромбоцитов, вызванной антикоагулянтами, которая часто встречается в образцах крови человека и может присутствовать в 5% образцов крови лошадей. Сгустки часто встречаются в образцах крови кошек и быков, предположительно, отчасти связанных с активацией во время сбора. Они могут быть обнаружены по всему мазку крови, но легко обнаруживаются по его периферийному краю, бокам и основанию. У людей сгустки тромбоцитов, вызванные ЭДТА, обычно имеют небольшой или средний размер, многочисленные, относительно однородные и содержат тромбоциты без признаков активации. Описания таких сгустков у домашних млекопитающих редки, но в одном случае они были описаны как крупные, и были представлены доказательства, позволяющие предположить, что механизмы могут различаться у лошадей и людей.

A. Форма
1. Неактивированные тромбоциты имеют дисковидную форму и выглядят в основном круглыми, овальными или удлиненными в пленках крови, изготовленных из неантикоагулированной крови (рис. 4.5А).
2. При применении антикоагулянтов ЭДТА (также с цитратом, но в меньшей степени) тромбоциты приобретают сфероидную форму и чаще выглядят круглыми.
3. Удлиненные тромбоциты, которые, вероятно, представляют собой фрагменты псевдоподий мегакариоцитов (пропластоцитов), могут быть более многочисленными во время стимулированного тромбопоэза (рис. 4.1Б). Удлиненные тромбоциты, соответствующие пропластоцитам, также наблюдались у кошек породы акита с макротромбоцитопенией неопределенной причины, а у кошки породы рэгдолл, гомозиготной по определенной мутации в гене β1-тубулина, были обнаружены тромбоциты легкой степени удлинения, которые, возможно, были связаны с тромбоцитопенией легкой степени тяжести на основании анализа мазка крови.
4.Активированные тромбоциты могут иметь периферические псевдоподии и не иметь гранул (рис. 4.5, B–D).

B. Размер
1. У большинства здоровых особей тромбоциты довольно однородны по размеру. Однако у кошек PDW больше, чем у других домашних млекопитающих, и диаметр некоторых тромбоцитов у кошек может превышать диаметр эритроцитов у кошек. Такая вариабельность размеров может быть связана с различием в содержании β1-тубулинового белка в микротрубочках тромбоцитов у кошачьих по сравнению с другими млекопитающими.
2. Не существует универсального определения гигантского тромбоцита (большой тромбоцит, шифт-тромбоцит, стрессовый тромбоцит, мегатромбоцит, мегатромбоцит или макротромбоцит) или стандарта, определяющего необходимое количество для их выявления. Однако тромбоциты, которые кажутся крупнее обычных эритроцитов, обычно классифицируются как гигантские тромбоциты, и если микроскописту кажется, что их количество увеличено, они могут быть выявлены.
3. Поскольку MPV является средним показателем для всех тромбоцитов, субпопуляции крупных тромбоцитов могут присутствовать и без повышенного MPV. Кроме того, крупные тромбоциты, видимые на предметном стекле, могут не учитываться при расчете MPV с помощью прибора, если они слишком велики, чтобы их можно было распознать как тромбоциты.
4. В некоторых мазках крови многие тромбоциты выглядят крупнее нормы, но не крупнее эритроцитов. В таких случаях гигантские тромбоциты могут не быть выявлены (в зависимости от лабораторного протокола), но MPV может быть увеличен. Фотографии, иллюстрирующие это, можно найти в описании синдрома Бернара – Сулье у собак – редкого врожденного дефекта тромбоцитов.
5. Гигантские тромбоциты обычно указывают на новую или продолжающуюся стимуляцию тромбопоэза в течение нескольких дней до взятия образца, как правило, вследствие деструктивной или потребительской тромбоцитопении. Они могут сопровождаться повышением MPV. Однако они не подтверждают достаточное количество мегакариоцитов, поскольку тромбопоэз может стимулироваться при гипоплазии мегакариоцитов.
6. Гигантские тромбоциты также встречаются при некоторых врожденных нарушениях функции тромбоцитов (например, аномалиях Мэйхегглина или дефектах β1-тубулина, как показано на рисунках 4.5, D и E), клональных гематологических нарушениях, сокращении селезенки и некоторых вирусных инфекциях острого лейкоза кошек.

C. Включения
1. Гранулы
a. При окраске по Райту неактивированный тромбоцит имеет прозрачную или бледно-голубую цитоплазму, содержащую мелкие розовые или фиолетовые гранулы. Эти гранулы содержат множество веществ, которые могут высвобождаться для стимуляции функций тромбоцитов, включая гемостаз и восстановление тканей.
b. При активации гранулы могут быть централизованными (рисунки 4.5B и D) или отсутствовать (секретироваться) (рисунок 4.5C). Гранулы, как правило, наиболее выражены в тромбоцитах кошек и быков и наименее выражены в тромбоцитах лошадей.
c. При дистромбопоэзе могут наблюдаться отклонения в размере, форме и окраске гранул (рисунок 4.6A). Могут быть выражены мелкие или крупные гипогранулированные тромбоциты. Мегакариоциты также могут быть атипичными (рисунки 4.6B и C).
2. Морулы Anaplasma platys (базовое название Ehrlichia platys) могут присутствовать в тромбоцитах (рис. 4.5F). Их необходимо дифференцировать от осадка, полученного при окрашивании, и фрагментов ядерного материала. При подозрении на них для подтверждения диагноза можно использовать специфический анализ методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

A. Тромбоцитопения — это патологическое состояние, при котором уровень тромбоцитов у пациента ниже допустимого нижнего референтного предела. Снижение уровня тромбоцитов в образце не означает, что у пациента тромбоцитопения, если только не исключена псевдотромбоцитопения. Для того чтобы доверять автоматизированным данным о концентрации тромбоцитов, при оценке мазка крови слипание тромбоцитов должно отсутствовать или быть незначительным.

B. Необходимо внимательно учитывать сигналы, поступающие от животного, и либо использовать соответствующие референтные значения (RI), либо корректировать интерпретацию в соответствии с ожидаемыми отклонениями от общих RI. Сравнение с анамнезом или исходными значениями может быть полезным.
1. Порода: У многих борзых концентрация тромбоцитов значительно ниже, чем у собак других пород, и есть данные, что у других пород собак разница в концентрации тромбоцитов достигает 150 000–200 000/мл между средними концентрациями тромбоцитов у пород с более низкой концентрацией (немецкие овчарки, лабрадоры-ретриверы) и породами с более высокой концентрацией (пекинесы, мопсы, померанские шпицы). У сиба-ину, немецких бордоских догов, польских огарей и некоторых неборзых собак концентрация тромбоцитов также может быть значительно ниже, чем у других собак. Напротив, нижний контрольный предел [количества тромбоцитов] у исландских лошадей в Австрии, как сообщалось, был выше, чем в большинстве контрольных популяций.
2. Пол: У собак количество тромбоцитов, по-видимому, несколько выше (до 10%) у самок, чем у самцов, а у интактных самок и самцов – чем у кастрированных.
3. Возраст: У собак количество тромбоцитов может постепенно увеличиваться примерно на 100 000/мкл по мере взросления собаки от 1–2 до 12 лет. Показатели у новорожденных особей могут отличаться от показателей у взрослых особей, например, у телят голштинской породы оно выше, чем у взрослых коров голштинской породы.

C. Основное клиническое значение тромбоцитопении заключается в потенцировании кровотечения при значительном снижении концентрации тромбоцитов (обычно < 30 000/мкл). Петехии и экхимозы являются отличительными признаками тяжелой тромбоцитопении, хотя тяжелая тромбоцитопения (например, 3000/мкл) может протекать и без кровотечения. Часто встречаются кровотечения из слизистых оболочек (носовое кровотечение, гематохезия или мелена), гематурия, гифема и длительное кровотечение после случайной или преднамеренной травмы (например, венепункции). Гематомы, не связанные с венепункцией, чаще образуются у крупного рогатого скота или лошадей, чем у собак и кошек. В одном исследовании сообщалось, что гемоперитонеум был наиболее распространенным клиническим признаком у собак с тромбоцитопенией, но гемоперитонеум не был определен. Неврологические симптомы могут отражать кровотечение в центральной нервной системе.

D. Тромбоцитопения не является заболеванием. Ее наличие отражает одно из многих потенциальных нарушений, вызванных одним или несколькими патогенетическими механизмами (рис. 4.2).

Ложная тромбоцитопения, возникающая, когда в образце подсчитаны не все тромбоциты. Она встречается очень часто и должна быть исключена перед интерпретацией результатов анализа. Её можно заподозрить, когда автоматические анализаторы указывают на наличие скоплений тромбоцитов (но также и без их маркировки), или когда в мазках крови присутствуют скопления тромбоцитов или множество гигантских тромбоцитов.

1. Для адекватного образования тромбоцитов необходима здоровая популяция мегакариоцитов; мегакариоцитов должно быть достаточно, и они должны выделять тромбоциты. Мегакариоциты могут быть повреждены из-за генерализованного заболевания костного мозга или из-за специфичных для мегакариоцитов заболеваний, которые либо снижают мегакариопоэз, либо нарушают тромбопоэз. Необъяснимая бицитопения и панцитопения указывают на возможность генерализованного заболевания костного мозга.

2. Бессимптомная макротромбоцитопения — распространённое наследственное заболевание у кавалер-кинг-чарльз-спаниелей, которое также было зарегистрировано у собак других пород. Мутации в гене β1-тубулина, белка, участвующего в сборке микротрубочек, связаны с нарушением тромбопоэза и образованием меньшего количества тромбоцитов (макротромбоцитов), но, как правило, более крупных, что приводит к Pct, который обычно аналогичен показателю у здоровых собак. Концентрация тромбоцитов 50–100 × 103/мкл является обычным явлением, а у некоторых собак она может быть <25 000/мкл, но у больных собак клинических нарушений гемостаза не наблюдается. Процент крупных тромбоцитов обычно увеличивается со снижением [тромбоцитов] у больных собак.
а. Хотя первоначально сообщалось об аутосомно–рецессивном характере наследования у кавалер-кинг-Чарльз-спаниелей, концентрация тромбоцитов в 100 000-200 000/мкл у собак, гетерозиготных по точечной мутации, позволяет предположить, что у них может быть аутосомно-доминантное наследование. При оценке этих тромбоцитов у гомозигот отсутствовали хорошо развитые кольца микротрубочек по окружности.
б. Однонуклеотидный полиморфизм, выявленный у некоторых норфолк-терьеров и некоторых керн-терьеров, предсказывает изменение β1-тубулина, которое отличается от дефекта у кавалер-кинг-Чарльз-спаниелей, но связано с аналогичным фенотипом тромбоцитов у гомозигот. Этот дефект может иметь аутосомно-рецессивный характер наследования.
c. У одной бессимптомной кошки породы рэгдолл, гомозиготной по другой мутации гена β1-тубулина, была выявлена умеренная тромбоцитопения (оценка по мазку крови) и крупные удлиненные тромбоциты.
d. Сообщалось о бессимптомной макротромбоцитопении у мопса с аномалией Мэй–Хегглина, вызванной мутацией в гене миозина 9. Аномалия Мэй–Хегглина может быть симптоматической или бессимптомно протекать у людей; вероятно, это верно и для других видов.
e. Выявление бессимптомной макротромбоцитопении важно для предотвращения ненужной терапии и применения соответствующих методов определения точной концентрации тромбоцитов.
(1) Полезны микроскопические показатели гемоцитометрии или оценки по мазкам крови.
(2) Автоматизированные импедансные методы ненадежны, когда значительное количество тромбоцитов превышает верхний порог, установленный анализатором (который зависит от анализатора); результаты для определения [тромбоцитов] будут ложно заниженными, если они будут предоставлены.
(3) Оптический анализ улучшает обнаружение тромбоцитов, поскольку помимо объема оцениваются внутренние характеристики клеток. Однако [количество тромбоцитов] может быть ложно низким, особенно при более тяжелой тромбоцитопении и более крупных тромбоцитах.
(4) Ветеринарный тест QBC выдает ложно завышенные значения [тромбоцитов] у собак с макротромбоцитопенией, но указанные значения могут обоснованно отражать

3.  Синдром Бернара–Сулье — редкое наследственное заболевание тромбоцитов, встречающееся у кокер-спаниелей европейского происхождения. У больных собак наблюдается лёгкая или умеренная тромбоцитопения, повышенный объём тромбоцитов (MPV) и нарушения первичного гемостаза, которые могут вызывать клинические проблемы с кровотечением. У людей с синдромом Бернара–Сулье снижение уровня тромбоцитарного гликопротеина Ib снижает стимуляцию выработки печёночным Tpo, тем самым снижая тромбопоэз.

4. Приобретенная селективная амегакариоцитарная тромбоцитопения редко встречается у собак и кошек. Для надежного заключения об отсутствии мегакариоцитов аспират костного мозга и керновые образцы должны быть отличного качества.
a. Некоторые случаи могут быть иммуноопосредованными, например, у людей с документально подтвержденным разрушением мегакариоцитов или их предшественников под действием антител или клеток, или с разрушением необходимых цитокинов под действием антител.
b.  Антимегакариоцитарные антитела могут нарушать тромбопоэз без мегакариоцитарной гипоплазии или аплазии. У собак, которым вводили кроличью антисыворотку против собачьих тромбоцитов, развилась выраженная тромбоцитопения с морфологическими изменениями в мегакариоцитах, что указывало на возможность нарушения функции мегакариоцитов без мегакариоцитарной гипоплазии. Плазма крови некоторых людей с TBI (Иммуноопосредованной тромбоцитопенией) подавляет мегакариопоэз и тромбопоэз в клеточных культурах.

5. Неонатальной панцитопенией крупного рогатого скота называется заболевание телят (обычно в возрасте 1-4 недель), при котором цитопения вызывается поствакцинальными аллостральными антителами, которые воздействуют на основные антигены класса I гистосовместимости, содержащиеся в предшественниках костного мозга теленка и циркулирующих лейкоцитах и тромбоцитах. Основные клинические и лабораторные данные включают тяжелую постколостерную лейкопению и тромбоцитопению, часто сопровождающуюся кровоизлияниями, и развитие генерализованной гипоплазии костного мозга. В 2007 году в Европе началась вспышка, связанная с использованием вакцины (и адъюванта), которая содержала остаточные бычьи белки, полученные в результате использования клеток почек крупного рогатого скота для культивирования вируса, используемого в вакцине. Матери, которые вырабатывали аллоантитела к этим белкам, передавали их через молозиво телятам, некоторые из которых были поражены. Применение этой вакцины было прекращено, но с тех пор сообщалось о подобных случаях аллоиммунной панцитопении у телят. Причина неизвестна, но другие вакцины, произведенные с использованием аллогенных клеток, потенциально могут вызывать это заболевание.

6. Препараты/токсины
a. Лекарственные средства с предсказуемым и дозозависимым миелосупрессивным действием (примеры)
(1) Противоопухолевые химиотерапевтические средства, включая алкилирующие агенты, антиметаболиты, антрациклины и антибиотики (например, доксорубицин), часто вызывают тромбоцитопению через 1-2 недели после соответствующего или чрезмерного (передозировки) приема препарата.
(2) Эстрогены из экзогенных или эндогенных источников (например, новообразования из клеток Сертоли в яичках, редкие гранулезно-клеточные новообразования яичников и редкие интерстициально-клеточные новообразования у собак) могут вызывать тромбоцитопению или апластическую панцитопению. Подавляющие дозы вызывают тромбоцитопению через неделю или более, и тромбоцитопения может сохраняться в течение нескольких недель. Миелосупрессия может быть вызвана ингибитором, вырабатываемым стромальными клетками тимуса в ответ на эстроген.
(3) Отравление папоротником-орляком может вызвать апластическую анемию с тромбоцитопенией у жвачных животных, как и трихотеценовые микотоксины. Предположительно, трихотеценовые микотоксины, содержащиеся в кошачьем корме, были причиной вспышки миелосупрессивной панцитопении (с тромбоцитопенией) у кошек в Соединенном Королевстве.
b. Лекарственные средства (токсиканты) с особыми (т.е. спорадическими и непредсказуемыми) миелосупрессивными эффектами (примеры)
(1) Подозрение на идиосинкразическую миелосупрессию возникает гораздо чаще, чем это доказано; сообщаемые ассоциации могут не отражать причинно-следственную связь. Повторное лечение тромбоцитопении после первоначального выздоровления могло бы подтвердить причинно-следственную связь, но таких повторных процедур следует избегать. При подозрении на потенциально опасные препараты отменяют, но последующее улучшение может быть связано с отменой препарата, а может и не быть.
(2) Фенилбутазон и меклофенамовая кислота являются нестероидными противовоспалительными препаратами, которые вызывают гипоплазию костного мозга и бицитопению или панцитопению у собак, а в случае фенилбутазона, вероятно, и у лошадей.
(3) Триметоприм-сульфадиазин и триметоприм-сульфаниламид были связаны с апластической анемией (апластической панцитопенией) у собак и кошек. Это явление встречается редко и непредсказуемо в обычных дозах. Однако потенцированные сульфаниламиды, как и ожидалось, ингибируют последовательные этапы метаболизма фолиевой кислоты, подавляя синтез ДНК. Это может способствовать развитию апластической анемии и тромбоцитопении. Эти препараты также могут вызывать иммуноопосредованное разрушение тромбоцитов посредством образования триметоприм-сульфа-зависимых антител.
(4) Гризеофульвин вызывал угнетение костного мозга у кошек, а также у одной кошки наблюдалась идиосинкразическая реакция на альбендазол.
(5) Альбендазол и фенбендазол вызывали у собак, а у людей сообщалось о миелосупрессии, вызванной альбендазолом.

7. Инфекции: Патогенез тромбоцитопении, связанной со многими инфекциями, многофакторный (см. Тромбоцитопения, раздел II.F.1), но часто включает снижение продукции тромбоцитов. В снижении продукции могут участвовать несколько механизмов.
a.  Прямое инфицирование мегакариоцитов или других гемопоэтических клеток-предшественников может снизить мегакариопоэз и, следовательно, тромбопоэз или снизить тромбопоэз, несмотря на адекватный мегакариопоэз. Потенциальными примерами являются инфекции, вызванные вирусом острой вирусной диареи крупного рогатого скота и вирусом чумы плотоядных.
b.  Миелосупрессивные цитокины могут вырабатываться в ответ на инфекцию (например, вирусом инфекционной анемии лошадей).
c.  Некоторые инфекции (например, хронический эрлихиоз, вызванный Ehrlichia canis, и парвовирусная инфекция собак) связаны с острой (парвовирус) или хронической (миелосупрессивный эрлихиоз) генерализованной гипоплазией костного мозга и тромбоцитопенией, но механизмы этого неясны. Парвовирусные инфекции собак могут вызывать супрессорную тромбоцитопению путем прямого инфицирования гемопоэтических клеток-предшественников. Однако вирусный антиген обнаруживался в минимальном количестве и непоследовательно в костном мозге экспериментально инфицированных собак, а если и присутствовал, то не в распознаваемых клетках мегакариоцитарного ряда. Тромбоцитопения при парвовирусе также может быть вызвана септицемией и/или эндотоксемией, связанной с тяжелым энтеритом.
d.  Нарушение продуктивности может способствовать тромбоцитопении, возникающей у некоторых кошек с вирусной лейкемией кошек, но последствия могут быть косвенными, через вторичные нарушения, включая гемические новообразования.

8. Облучение (всего тела или экстенсивное): Это может вызвать общее угнетение функции костного мозга и тромбоцитопению из-за повсеместной гибели клеток. Тромбоцитопения была длительной (от недель до месяцев) и тяжелой у собак, получавших аутологичную трансплантацию костного мозга после полного облучения организма с абляцией костного мозга.

9. Замена костного мозга (миелофитиз): Новообразования костного мозга (первичные гемические или метастатические), миелофиброз, остеопетроз или остеосклероз могут вызывать миелосупрессию. Механизмы могут включать физическую замену нормальных клеточных популяций, конкуренцию за питательные вещества, нарушение кровоснабжения, лизис клеток костного мозга и секрецию ингибиторов. Мегакариоцитарный лейкоз может быть связан с тромбоцитопенией, вероятно, из-за нарушения тромбопоэза и снижения уровня тромбопоэза в крови.

10. Мегакариобластный лейкоз: Хотя может наблюдаться усиление тромбопоэза и тромбоцитоз, тромбоцитопения из-за снижения тромбопоэза может возникать из-за дефектов или незрелости мегакариоцитов.

11. Миелонекроз (с миелофиброзом или без него): Инфекции, новообразования или токсиканты могут вызвать некроз костного мозга в достаточной степени, чтобы способствовать развитию тромбоцитопении.

12. Снижение продукции тромбоцитов в легких из-за уменьшения количества мегакариоцитов, достигающих легких (например, шунтирование справа налево, операция по сердечно-легочному шунтированию) или из-за заболевания легких (например, синдром тяжелой острой респираторной реакции) предположительно является потенциальным фактором, способствующим тромбоцитопении у людей.

13. Печеночная недостаточность: Хотя тромбоцитопения при печеночной недостаточности домашних млекопитающих не очень хорошо документирована, считается, что снижение выработки тромбопоэтина в печени способствует возникновению тромбоцитопении у людей с печеночной недостаточностью.

1. Если повышенная выработка тромбоцитов не компенсирует ускоренное разрушение или расход тромбоцитов, развивается тромбоцитопения.

a. Потребление тромбоцитов обычно относится к использованию тромбоцитов при выполнении функций гемостаза, будь то физиологических или патологических.
б) Разрушение тромбоцитов - это гибель тромбоцитов другими способами, часто опосредуемая иммунитетом. Однако повышенное разрушение может быть и неиммунным:
(1) Повышенный апоптоз и клиренс тромбоцитов могут наблюдаться при миелодиспластических синдромах, некоторых инфекциях, приеме лекарственных средств, вызывающих апоптоз, или при состояниях, снижающих активность протеинкиназы А тромбоцитов, важного регулятора апоптоза тромбоцитов. (Это также может происходить вторично по отношению к цитотоксическим Т-лимфоцитам при IMT.)
(2) Повышение клиренса тромбоцитов в печени может происходить через азиалогликопротеиновые рецепторы при снижении гликозилирования поверхностных белков тромбоцитов, например, под действием нейраминидаз, выделяемых определенными бактериями, или при связывании фактора Виллебранда. (Некоторые антитромбоцитарные антитела также могут способствовать десиалилированию.)

2. Иммунологические причины снижения выживаемости тромбоцитов

a. Общие понятия
(1) Тромбоцитопения может быть вызвана различными приобретенными нарушениями, общим для которых является то, что тромбоцитопения в значительной степени опосредована иммунной системой. В большинстве случаев иммунная система животного вырабатывает антитела, которые напрямую (например, аутоантитела, аллоантитела) или косвенно (например, к адсорбированному антигену посредством иммунной адгезии) связываются с его собственными тромбоцитами (PSAIg, Иммуноглобулин, ассоциированный с поверхностью тромбоцитов). Это приводит к ускоренному разрушению тромбоцитов MPS (Системой мононуклеарных фагоцитов), особенно в селезенке. Разрушение в значительной степени опосредовано Fc-рецепторами для PSAIgG, а также рецепторами комплемента, ассоциированными с поверхностью тромбоцитов, и, возможно, в некоторой степени рецепторами азиалогликопротеина (Эшвелла–Морелла) или рецепторами, распознающими апоптотические изменения поверхности тромбоцитов после изменений, вызванных Т-лимфоцитами или антителами. Кроме того, тромбоциты могут быть лизированы непосредственно комплексом комплемента, атакующим мембраны, или аутореактивными цитотоксическими Т-лимфоцитами, и может наблюдаться иммунологическое подавление продукции тромбоцитов в результате воздействия аутоантител или аутореактивных Т-лимфоцитов на мегакариоциты. Важность каждого механизма может варьироваться в зависимости от конкретного человека.
(2) IMT (Иммуноопосредованная тромбоцитопения), вызванная аллоантителами к аллоантигенам, которые образуются в молозиве, является аллоиммунной тромбоцитопенией, а не аутоиммунной тромбоцитопенией. Аллоантитела также опосредуют разрушение тромбоцитов после переливания несовместимых тромбоцитов.
(3) IMT, не связанный с выявленным заболеванием или состоянием, считается первичным IMT (первичным ITP (идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура)) и предположительно является аутоиммунным, хотя необнаруженное основное заболевание не исключает основного заболевания. Несмотря на явное иммуноопосредованное действие, первичный IMT является идиопатическим в том смысле, что основные триггеры неизвестны. Какими бы ни были триггеры, происходит потеря толерантности к самим себе и атакуются антигены тромбоцитов/мегакариоцитов.
(4) IMT, являющаяся частью более широкого аутоиммунного заболевания (например, СКВ, синдром Эванса), считается вторичной IMT (вторичной ITP (идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура)), как и аутоиммунная тромбоцитопения, связанная с основными инфекциями, новообразованиями или признанными иммунодефицитными расстройствами. Однако основополагающими факторами, вызывающими то, что в настоящее время считается первичной IMT, могут быть инфекции или воздействие химических веществ, которые не были распознаны.
(5) IMT, опосредованный иммунным присоединением иммунных комплексов к тромбоцитам или антителами к адсорбированным несамоантигенам, технически не является аутоиммунным или аллоиммунным, поскольку в нем не участвуют ни аутоантитела, ни аллоантитела к другим антигенам. Однако конечный эффект тот же самый.
(6) Аббревиатура «ITP» обычно используется для первичной и вторичной аутоиммунной тромбоцитопении. Первоначально она использовалась для обозначения «идиопатической тромбоцитопенической пурпуры» у людей, но после того, как был продемонстрирован иммунологический механизм, ее стали использовать для обозначения «иммунной тромбоцитопенической пурпуры». Однако пурпура часто отсутствует у пациентов с IMT, поэтому в настоящее время в медицине рекомендуется продолжать длительное использование ITP, но с пониманием того, что это сокращение от «иммунной тромбоцитопении». В этом тексте используется термин «иммунноопосредованная тромбоцитопения» (IMT), что соответствует IMT и IMN (иммунноопосредованная нейтропения).

b. Первичная IMT

(1) Предполагаемая первичная IMT хорошо документирована и относительно распространена только у собак и людей, но, по-видимому, встречается также у кошек и лошадей. По крайней мере, у людей это заболевание проявляется как снижением выживаемости тромбоцитов, так и нарушением их выработки. Выработка тромбоцитов недостаточна для того, чтобы сбалансировать повышенную скорость разрушения тромбоцитов, несмотря на то, что в большинстве случаев она достаточна для увеличения количества мегакариоцитов.
(а) Снижение выживаемости тромбоцитов: Исследования иммуноблоттинга и иммунопреципитации подтвердили роль мембранных антигенов-мишеней тромбоцитов, по крайней мере, в некоторых случаях идиопатического IMT у собак. У людей большинство антител направлено против аутоэпитопов на наиболее распространенных мембранных белках тромбоцитов - α2β3 (рецептор фибриногена) и гликопротеине Ib (рецептор фактора Виллебранда). Тромбоциты также могут быть разрушены цитотоксическими Т-лимфоцитами.
(б) Снижение выработки тромбоцитов: данные подтверждают, что некоторые антитела нацелены на эпитопы тромбоцитов на мегакариоцитах и нарушают образование тромбоцитов и тромбопоэз. Кроме того, цитотоксические Т-лимфоциты могут атаковать мегакариоциты и нарушать тромбопоэз. Кроме того, у многих пациентов с IMT повышение уровня [Tpo] в сыворотке крови незначительно, что создает необходимость в терапии агонистами рецепторов Tpo. Теории, объясняющие снижение Тпо-реакции при IMT, включают переключение с Тпо–индуцирующего клиренса тромбоцитов печеночными азиалогликопротеиновыми рецепторами на преимущественно неиндуцирующий Тпо клиренс селезеночных тромбоцитов через рецепторы IgG и комплемента.

(2) Общими лабораторными признаками у собак являются тромбоцитопения (обычно < 50 × 103/мкл и часто < 10 × 103/мкл), анемия (часто связанная с кровоизлиянием), мегакариоцитарная гиперплазия (может наблюдаться мегакариоцитарная гипоплазия), а также повышенный, сниженный MPV (Средний объем тромбоцитов) или в пределах референсного интервала. Эти данные не являются специфичными для IMT. Диагноз IMT не должен основываться только на степени тромбоцитопении, поскольку при других состояниях степень тяжести может быть такой же.

(3) Первичная IMT диагностируется на основании клинических данных и исключения других причин; кажущийся ответ на иммуносупрессивную терапию также может быть положительным, но может быть лишь совпадением. Исследование костного мозга обычно не показано или не имеет смысла. Показаний для анализа на антитромбоцитарные антитела мало (см. раздел «Тесты на антитела при иммуноопосредованной тромбоцитопении» в конце этой главы).

c. Медикаментозная IMT

(1) Воздействие определенных лекарственных препаратов может привести к повышению уровня PSAIg (Иммуноглобулин, ассоциированный с поверхностью тромбоцитов) и, как следствие, ускоренному разрушению тромбоцитов из-за продукции лекарственно-зависимых или нелекарственно-зависимых антител. Продукция тромбоцитов также может быть нарушена.
(a) Лекарственно-независимые антитела не требуют лекарственного препарата для связывания; они могут связываться с эпитопом тромбоцитов, который перекрестно реагирует с препаратом или метаболитом.
(b) Лекарственно-зависимые антитела могут специфически связываться с любым из следующих объектов: препаратом или метаболитом на поверхности тромбоцитов, поверхностным эпитопом тромбоцитов, открытым в присутствии препарата или метаболита, или комбинированным неоантигеном препарат-тромбоцит на мембране тромбоцитов. Иммунные комплексы, включающие препарат, могут связываться через Fc-рецепторы тромбоцитов у видов, у которых они есть (например, у людей), или путем иммунного адгезии у видов с рецепторами комплемента тромбоцитов (вероятно, у собак).

(2) Подозрение на лекарственно-индуцированную IMT возникает, когда необъяснимая тромбоцитопения, обычно тяжёлая, развивается через несколько дней (5–10) после приёма препарата и быстро исчезает после его отмены. При повторном приёме препарата тромбоцитопения должна рецидивировать, чтобы подтвердить лекарственно-индуцированную IMT.

(3) Для подтверждения лекарственно-индуцированного интимального медианного индекса с помощью лекарственно-зависимых антител необходимо соблюдение следующих строгих критериев:
(a) Повышенный уровень PSAIg (Иммуноглобулин, ассоциированный с поверхностью тромбоцитов) у пациента, у которого развилась тромбоцитопения как минимум через несколько дней после воздействия препарата
(b) Антитела в плазме пациента, которые связываются in vitro с тромбоцитами или антигенами тромбоцитов в присутствии, но не в отсутствие препарата или его метаболита (такие анализы и опыт их проведения в ветеринарной медицине весьма ограничены)
(c) Разрешение как тромбоцитопении, так и повышенного уровня PSAIg после отмены препарата
(d) Рецидив после повторного приема препарата (не рекомендуется)

(4) Предполагается, что многие лекарственные препараты вызывают IMT у людей и собак, но у людей причинно-следственная связь более очевидна. Ниже перечислены наиболее распространенные доказанные причины лекарственно-индуцированной IMT у людей: триметоприм/сульфаметоксазол, ванкомицин, пенициллин, рифампицин, карбамазепин, цефтриаксон, ибупрофен, хинин, хинидин, миртазапин, оксалиплатин, сурамин, абциксимаб, тирофибан, эптифибатид и гепарин.

(5) У собак соли золота (ауранофин, тиомалат натрия золота и, возможно, ауротиоглюкоза) и сульфаниламиды (с триметопримом или без него) имеют сильное влияние, что подтверждается анализами на антитела к тромбоцитам. Метимазол и пропилтиоурацил были обнаружены у кошек, а пенициллин и триметоприм-сульфадоксин могли привести к развитию IMT у лошадей.

(6) Гепарин, частая причина индуцированной иммунными комплексами инфильтрации мембран (IMT) у людей, не вызывает аналогичного состояния у животных. Патогенез индуцированной гепарином инфильтрации мембран (IMT) включает Fc-рецепторы тромбоцитов для IgG, которые связаны с комплексами гепарина и тромбоцитарного фактора 4. Однако Fc-рецепторы для IgG не удалось обнаружить на тромбоцитах кроликов, и они могут отсутствовать на тромбоцитах других домашних млекопитающих. Функциональный эквивалент человеческого FcγRII не обнаружен на тромбоцитах собак.

d. IMT, связанная с инфекцией (обычно многофакторная; см. Тромбоцитопения, раздел II.F.1)

(1) Патогенез тромбоцитопении, связанной с инфекцией, обычно многофакторный или неизвестен, но многие бактериальные, вирусные, грибковые и протозойные заболевания связаны с IMT у людей. Аналогичные ассоциации вероятны и у домашних млекопитающих.
(2) IMT, связанная с инфекцией, может быть вызвана (i) перекрестно-реактивными антителами, (ii) продукцией аутоантител, индуцированной бактериями, (iii) воздействием на организм скрытых антигенов мембраны тромбоцитов, (iv) связыванием антител к возбудителю инфекции, прикрепленному к мембране тромбоцитов, или (v) индукцией иммунных комплексов, которые адгезируются к мембране тромбоцитов.
(3) IMT, связанная с инфекцией, может возникать при остром эрлихиозе собак и, соответственно, при инфекциях, вызванных родственными организмами родов Ehrlichia и Anaplasma. Тромбоцитопения также встречается у кошек с инфекциями, вызванными E. canis или A. phagocytophilum, и у лошадей с инфекциями, вызванными A. phagocytophilum. К другим инфекционным заболеваниям с вероятным иммунным компонентом тромбоцитопении относятся пятнистая лихорадка Скалистых гор, гистоплазмоз, лейшманиоз, чума плотоядных или вакцинация модифицированным живым вирусом чумы плотоядных, инфекционная анемия лошадей и бабезиоз.
(4) Некоторые специалисты считают, что вакцинация ускоряет развитие клинически проявляющегося IMT у собак, но подтверждающие данные отсутствуют.

e. Неонатальная аллоиммунная тромбоцитопения

(1) Тромбоцитопения возникает, когда пассивно приобретенные (в основном через молозиво) материнские аллоантитела к отцовским эпитопам на тромбоцитах новорожденного циркулируют в крови новорожденного и опосредуют разрушение тромбоцитов. Материнские аллоантитела вырабатываются, когда плод в достаточной степени подвергается воздействию фетальных тромбоцитов, обладающих антигенными детерминантами отцовского происхождения, которые распознаются как чужеродные. Конкретные аллоантигены еще не идентифицированы, но анализ генов лошадей и собак, отвечающих за основные белки мембран тромбоцитов, выявил полиморфизмы, которые могут быть связаны с аллоиммунными заболеваниями. Неонатальная аллоиммунная тромбоцитопения была описана у лошадей, жеребят-мулов и свиней.
(2) Это заболевание необходимо дифференцировать с другими причинами тромбоцитопении у новорожденных, особенно с сепсисом. Подтверждение предполагает выявление повышенного уровня PSAIg у новорожденного, но не у матери, и демонстрацию наличия антител в крови матери, которые вступают в реакцию с отцовскими и неонатальными тромбоцитами, но не с материнскими. Подтвержденные тесты могут быть недоступны.
(3) Тромбоцитопения, сочетающаяся с нейтропенией и язвенным дерматитом, была описана у новорожденных жеребят и может иметь аллоиммунный патогенез.

е. Новообразования (обычно многофакторные; см. Тромбоцитопения, раздел II.F.2)

(1) Тромбоцитопения часто встречается у животных с новообразованиями. Причина часто многофакторна, но может включать иммунологические механизмы.
(2) Антитела, возможно, в форме иммунных комплексов, косвенно участвуют в развитии тромбоцитопении у некоторых собак с различными гемическими и негемическими новообразованиями. IMT ассоциируется с лимфомой у собак и лошадей.

g. Посттрансфузионная пурпура

(1) У людей, получающих переливание крови, это состояние возникает примерно через 1 неделю после переливания. Это связано с тяжелой тромбоцитопенией и высокими титрами аллоантител, реагирующих с тромбоцитами, которые опосредуют разрушение собственных тромбоцитов пациента в дополнение к перелитым тромбоцитам.
(2) Редко сообщалось о посттрансфузионной тромбоцитопении у собак, но патогенез тромбоцитопении в каждом конкретном случае не был установлен.

h. Системные иммуноопосредованные заболевания, такие как СКВ, связаны с активацией поликлональных В-лимфоцитов и выработкой аутоантител, направленных против множества мишеней, одной из которых могут быть тромбоциты.

(1) У собак с СКВ имеются свидетельства, хотя и редко документированные, повышения PSAIg.
(2) Синдром Эванса
(a) Впервые это состояние было описано у людей как идиопатическая иммунная гемолитическая анемия и сопутствующая тромбоцитопения или нейтропения, но в настоящее время этот термин используется для обозначения одновременной или последовательной IMT и IMHA (Иммуноопосредованная гемолитическая анемия). По крайней мере, у некоторых пациентов-людей антитела, вызывающие анемию и тромбоцитопению, различны. Информация о животных недоступна.
(б) IMHA с сопутствующим, предположительно, IMT встречается у собак (впервые сообщалось в 1965 году). В некоторых случаях непрямые анализы на наличие антител, реагирующих с тромбоцитами или мегакариоцитами, в плазме крови пациентов выявляли иммунный патогенез. Однако собаки с IMHA часто страдают протромботическими заболеваниями, поэтому тромбоцитопения может отражать потребление тромбоцитов вместо иммунологического разрушения или в дополнение к нему.
(c) У лошадей подозревался синдром Эванса, вторичный по отношению к лимфоме.

3. Неиммунологические причины снижения выживаемости тромбоцитов

а) Активация тромбоцитов при ускоренном потреблении: Любое нарушение, связанное с повышенной активацией тромбоцитов, может ускорить потребление тромбоцитов и привести к тромбоцитопении, если выработка тромбоцитов недостаточно компенсируется.

(1) Локализованное (контролируемое) внутрисосудистое свертывание (например, при гемангиосаркоме, тромбозе или кровоизлиянии) может быть связано с потреблением тромбоцитов в месте (s), где происходит свертывание.
(а) Активация каскада свертывания крови приводит к образованию тромбина (фактора IIa), мощного активатора тромбоцитов.
(b) Тромбин активирует тромбоциты. Активированные тромбоциты высвобождают вещества, активирующие тромбоциты, которые локально привлекают и потребляют больше тромбоцитов. При достаточно серьезном поражении может развиться тромбоцитопения.
(2) ДВС-синдром: Широко распространенная, неконтролируемая активация каскада свертывания крови может привести к тромбоцитопении таким же образом, как и локализованная коагуляция, но вероятность тромбоцитопении намного выше. ДВС-синдром может быть вызван сепсисом, эндотоксикозом, синдромом системной воспалительной реакции, IMHA (ИОГА) у собак, острым панкреатитом, тяжелыми повреждениями тканей (тупая травма, ожоги, ишемический некроз, тепловой удар), новообразованиями (особенно злокачественными) и некоторыми видами отравлений (например, змеями, пчелами).
(3) Лекарственные препараты и посторонние материалы: Некоторые лекарственные препараты вызывают или способствуют развитию тромбоцитопении, непосредственно воздействуя на тромбоциты.
(а) Протамина сульфат, используемый для устранения эффекта гепарина, может вызывать тяжелую тромбоцитопению у собак, получавших и не получавших гепарин, по-видимому, за счет прямого проагрегационного эффекта.
(b) Миметики BH3, используемые для индуцирования апоптоза в раковых клетках, ингибируют критический для выживания белок Bcl-xL в тромбоцитах, что приводит к апоптозу и тромбоцитопении. Это ограничивает дозы, в которых можно применять эти препараты.
(c) посторонние материалы, используемые в сосудистой системе (например, трубки и катетеры) тестируются и выбираются таким образом, чтобы свести к минимуму активацию тромбоцитов, но может наблюдаться ускоренное расходование тромбоцитов.
(4) Отравление (без учета ДВС-синдрома): Многочисленные виды ядов различных видов животных различаются по своему действию. Яд некоторых змей может содержать факторы, активирующие тромбоциты, которые вызывают тромбоцитопению при отсутствии ДВС-синдрома, и тромбоцитопения возникает у группы пациентов с вызванной ядом коагулопатией чахотки (VICC) (см. главу 5). Фосфолипаза А2, содержащаяся во многих ядах, и мелиттин, содержащийся в пчелином яде, могут вызывать цитотоксичность тромбоцитов (и эритроцитарной массы), апоптоз и изменения мембран, которые способствуют ускоренному выведению тромбоцитов.
(5) Васкулит или эндокардит: Воспаление кровеносных сосудов или эндокарда может изменять эндотелиальные клетки или приводить к повреждению субэндотелия, каждое из которых может привести к протромботическому состоянию и адгезии, агрегации и секреции тромбоцитов. Васкулит имеет инфекционные, иммуноопосредованные и химические причины.
(а) Инфекционные причины васкулита включают пятнистую лихорадку Скалистых гор, герпесвирусную инфекцию собак, дирофиляриоз, ангиостронгилез, инфекционный гепатит собак и вирусный артериит лошадей.
(б) Тромбоцитопения обычно ассоциируется с бактериальным эндокардитом, и в этом случае она может иметь многофакторный патогенез.
(c) Повреждение эндотелиальных клеток и некроз приводят к тромбоцитопении без ДВС-синдрома у собак с гемолитико-уремическим синдромом или кожной и почечной гломерулярной васкулопатией, впервые описанной у борзых в связи с приемом шига-токсина, вырабатываемого Escherichia coli. При оценке борзых важно признать, что концентрация тромбоцитов у них в здоровом состоянии часто ниже, чем обычно сообщаемые референтные нормы для собак.

b. Острая и тяжелая кровопотеря

(1) Когда кровотечение сопровождает тяжелую тромбоцитопению, кровотечение, вероятно, является вторичным по отношению к тромбоцитопении, а не к тяжелой тромбоцитопении, вызванной кровотечением. Однако потеря и потребление тромбоцитов в местах кровотечения могут вызывать или способствовать тромбоцитопении.
(2) У собак экспериментальная острая, тяжелая кровопотеря посредством флеботомии с замещением объема крови физиологическим раствором вызвала легкую или умеренную тромбоцитопению (снижение [тромбоцитов] до 50%).
(3) Тромбоцитопения иногда присутствует у кровоточащих собак с отравлением родентицидами антикоагулянтами. Тромбоциты, вероятно, расходуются ускоренными темпами при использовании в местах кровотечения по всему телу. При обширном кровотечении потеря тромбоцитов из организма также способствует тромбоцитопении, и тромбоцитопения может стать более тяжелой во время планового лечения жидкостями, переливаниями и витамином K1.

1. Тромбоциты могут обратимо перераспределяться в сосудистую систему определенных тканей (например, селезенки), и, следовательно, концентрация свободно циркулирующих тромбоцитов снижается. Эта тромбоцитопения возникает без снижения общей массы тромбоцитов в организме и, следовательно, не стимулирует тромбопоэз.
2. Термин "секвестрация" часто используется либо для обозначения обратимого перераспределения тромбоцитов, либо для обозначения необратимого удержания тромбоцитов в органах из-за их разрушения MPS (Система мононуклеарных фагоцитов). Однако в этом учебнике необратимое удаление тромбоцитов из кровообращения рассматривается как снижение выживаемости тромбоцитов, а не как секвестрация.
3. Аномальное распределение тромбоцитов может способствовать или в редких случаях вызывать выраженную тромбоцитопению.
4. Расстройства
a. Спленомегалия, по-видимому, вызывает накопление в селезенке фракции тромбоцитов, пригодной для обмена, при некоторых заболеваниях человека, таких как печеночная недостаточность, хотя выживаемость тромбоцитов также может снижаться.Аналогичные последствия спленомегалии могут наблюдаться у других видов животных.
b. Сильное переохлаждение (например, ректальная температура выше 20°C) может вызвать обратимое перераспределение тромбоцитов в печени и селезенке у собак.
c. Экспериментально установлено, что эндотоксемия связан с кратковременным накоплением тромбоцитов в легких у собак, но также имеет место и потребление тромбоцитов.

Значительное разбавление крови жидкостями с низким содержанием тромбоцитов (например, кристаллоидами, коллоидами, плазмой или эритроцитарной массой) может привести к легкому или умеренному снижению содержания тромбоцитов в крови.

1. Инфекции
a. Инфекционная тромбоцитопения может быть вызвана различными сочетаниями подавления продукции тромбоцитов (например, прямой инфекцией, иммуносупрессией или местными воспалительными процессами в костном мозге), изменением распределения тромбоцитов, повышенным поступлением тромбоцитов в кровь и иммуноопосредованным или неиммунным разрушением тромбоцитов, в том числе за счет повышенного апоптоза тромбоцитов или бактериальной десиализации.
b. Тромбоцитопения обычно связана с эндотоксемией и инфекциями.
c. Этиологическими агентами, часто связанными с тромбоцитопенией, являются некоторые бактерии (Ehrlichia spp., Anaplasma spp. и Borrelia spp.), грибы (например, Histoplasma spp.), вирусы (например, вирус инфекционной анемии лошадей) и простейшие (например, Leishmania spp., Babesia spp., Theileria spp. и Trypanosoma spp.).
d. Тромбоцитопения встречается несколько реже, но не неожиданно, при воздействии других микроорганизмов (например, Leptospira spp. и вируса иммунодефицита кошек).
e. Anaplasma platys (ранее Ehrlichia platys) – это риккетсиозные бактерии, которые инфицируют тромбоциты и мегакариоциты и вызывают инфекционную циклическую тромбоцитопению у собак. Инфекция может протекать субклинически или иметь клинические проявления. Паразитемия может быть выраженной, но часто слабо выраженной, поэтому окончательная идентификация возбудителя в мазках крови (рисунок 4.5F) может быть затруднена. Существуют методы молекулярной диагностики, которые позволили идентифицировать A. platys у кошек, у которых может не развиться клиническое заболевание из-за этого возбудителя. У кошек были зарегистрированы тромбоцитарные включения, похожие на Anaplasma platys (без фотографий), и ПЦР и секвенирование образца крови одной из таких кошек дали совпадение с A. platys.
f. Тяжелая лихорадка с синдромом тромбоцитопении (SFTS), вызываемая вирусом Даби бандавирусом (Dabie bandavirus) семейства Phenuiviridae, характеризуется острым повышением температуры, летаргией, желудочно-кишечными симптомами, желтухой, лейкопенией, тромбоцитопенией и часто приводит к смерти людей и домашних кошек в Восточной Азии. Сообщалось также о случаях смертельного заболевания у собак. Сообщалось о случаях угнетения функции костного мозга и ускоренного разрушения клеток. Серологические исследования подтверждают, что многие домашние и дикие животные подвержены воздействию вируса, вероятно, через клещей, но сообщалось о прямой передаче этого зоонозного заболевания.

2. Новообразования
а) Многие виды новообразований, включая карциномы, саркомы, лимфомы и лейкозы, связаны с тромбоцитопенией. В одном исследовании примерно у 10% собак с новообразованиями была выявлена тромбоцитопения, хотя иногда из-за сопутствующих инфекций или терапии.
b. Тромбоцитопения может быть вызвана многими механизмами, как по отдельности, так и в сочетании. В отдельных случаях причины обычно являются предположительными. Возможные механизмы включают следующее:
(1) Снижение производства
(а) Миелофития, предположительно, является причиной тромбоцитопении у собак с множественной миеломой, острым лейкозом или хроническим лимфолейкозом. Иногда наблюдаются другие цитопении.
(б) Миелодиспластический синдром может сопровождаться нарушением тромбопоэза и усилением апоптоза тромбоцитов.
(c) Секреция эстрогена новообразованием может вызвать миелосупрессию.
(d) Химиотерапия может вызвать миелосупрессию.
(2) Снижение выживаемости тромбоцитов
(а) У некоторых онкологических больных наблюдается повышенная свертываемость крови, которая может способствовать тромбоцитопении, наблюдаемой у собак с опухолями тучных клеток или метастазами в печень. Однако у большинства обследованных собак с новообразованиями и сниженной выживаемостью тромбоцитов, согласно кинетическим исследованиям, наблюдалась гиперфибриногенемия, а период полураспада фибриногена не снижался. Это не подтверждает гипотезу о коагуляции.
(б) васкулит или тромбоз в новообразовании (например, гемангиосаркома, злокачественное новообразование эндотелиальных клеток) может ускорить расход тромбоцитов.
(c) Также может наблюдаться вторичный IMT, который был выявлен у собак с определенными новообразованиями (например, лимфомой) с помощью непрямых анализов на тромбоциты и мегакариоциты.
(d) Другие факторы могут включать кровоизлияние, вторичное по отношению к новообразованию, сепсис, вторичный по отношению к иммуносупрессии, и разрушение (фагоцитоз) опухолевыми макрофагами (например, гистиоцитарная саркома).
(3) Аномальное распределение тромбоцитов: Спленомегалия или гепатомегалия, вызванные опухолевой инфильтрацией (например, гемангиосаркомой) или вторичной гиперемией органов, могут быть связаны с секвестрацией тромбоцитов.

3. Лекарственные препараты/токсиканты: Как уже отмечалось (тромбоцитопения, разделы II.B.5, II.C.2.c и II.C.3.a(3)), тромбоцитопения, связанная с лекарственными препаратами, может быть вызвана миелосупрессией, ускоренным разрушением тромбоцитов (иммунных или неиммунных), или несколько механизмов. В некоторых случаях патогенез медикаментозной тромбоцитопении неясен даже после тщательного исследования.

4. Гипофосфатемия, вызванная гипералиминацией у голодающих собак, снижала выживаемость тромбоцитов и вызывала тромбоцитопению.
а) Тромбоцитопения была связана со снижением концентрации АТФ в тромбоцитах, вероятно, из-за связанного с этим снижения гликолиза. Конкретный механизм ускоренного выведения тромбоцитов не был определен.
б. У кошек, получавших полное парентеральное питание, также развилась тромбоцитопения, но гипофосфатемия у них не наблюдалась.

5. Анафилаксия (гиперчувствительность I типа)
a.  Это иммуноопосредованная реакция, но механизм тромбоцитопении не полностью изучен. По-видимому, неиммунные факторы играют важную роль в возникновении тромбоцитопении, по крайней мере, при некоторых реакциях гиперчувствительности.
b.  Анафилактическая тромбоцитопения может быть вызвана медиаторами воспаления, недостаточным свертыванием крови или взаимодействием иммунных комплексов с тромбоцитами. Мембранные рецепторы иммуноглобулина Е (IgE) присутствуют в субпопуляции тромбоцитов человека и опосредуют воспалительные реакции тромбоцитов у некоторых видов.

6. У людей с печеночной недостаточностью тромбоцитопения может быть вызвана снижением выработки тромбопоэтина и секвестрацией селезенки. Это может быть характерно для домашних млекопитающих, но это четко не задокументировано.

При лечении собак с IMT следует избегать приема аспирина и других антитромбоцитарных препаратов. Прием препаратов, которые могут вызывать тромбоцитопению или способствовать ее развитию, следует по возможности прекратить. Травмы (включая внутримышечные инъекции) должны быть сведены к минимуму, следует избегать пункции яремной вены и надлежащим образом лечить сопутствующие проблемы. Другая терапия должна быть направлена на повышение концентрации тромбоцитов, достаточной для предотвращения клинического кровотечения, хотя некоторые собаки могут хорошо себя чувствовать, несмотря на низкую концентрацию тромбоцитов и отсутствие медикаментозного лечения. Концентрация тромбоцитов в пределах контрольного интервала является предпочтительной целью и может быть достигнута у большинства пациентов.  Однако некоторые пациенты могут быть невосприимчивы к терапии или не переносить побочные эффекты лечения. У таких пациентов достижение концентрации тромбоцитов в 50 000-100 000 мкл, вероятно, является адекватным при отсутствии дисфункции тромбоцитов.
Иммуносупрессивные дозы кортикостероидов являются основой терапии у собак, которые, как сообщается, стабилизируют эндотелий сосудов, снижают фагоцитоз макрофагами опсонизированных тромбоцитов, увеличивают выработку тромбоцитов и уменьшают выработку антител. Прием преднизолона обычно начинается с дозы 1-2 мг/кг каждые 12 часов; эквивалентную дозу дексаметазона можно рассчитать, разделив дозу преднизолона на семь. В настоящее время нет данных, позволяющих предположить, что более высокий уровень иммуносупрессии более эффективен, чем более низкий, или что дексаметазон более эффективен, чем преднизолон, у собак. У многих собак кровотечение может прекратиться до повышения концентрации тромбоцитов. Дозу глюкокортикоидов постепенно снижают в течение нескольких месяцев, а затем отменяют или поддерживают на минимальной эффективной дозе в зависимости от концентрации тромбоцитов. Побочные эффекты или неадекватный ответ оправдывают другие терапевтические подходы.
У собак с IMT применялись многочисленные дополнительные иммуносупрессивные препараты. Решения о выборе этих препаратов часто основаны на клинической оценке, поскольку отсутствуют рандомизированные контролируемые клинические испытания на собаках с IMT. Однако нельзя исключать положительный эффект дополнительных препаратов, и комбинированная терапия с уменьшением доз отдельных препаратов может уменьшить нежелательные побочные эффекты. Были использованы азатиоприн, циклофосфамид, даназол, циклоспорин, микофенолат, винкристин и человеческий гамма-глобулин.
В одном проспективном, контролируемом, но нерандомизированном исследовании комбинированная терапия преднизолоном и винкристином (0,02 мг/кг однократно внутривенно) была связана с более быстрым повышением концентрации тромбоцитов и сокращением продолжительности госпитализации по сравнению с лечением только преднизолоном.
У собак спленэктомия давала разные результаты. Еще предстоит выяснить, можно ли предсказать реакцию на спленэктомию. Гемотропный микоплазмоз является общепризнанным осложнением спленэктомии и иммуносупрессии у собак, но долгосрочные исследования этой проблемы в клинических случаях IMT отсутствуют.
Существует мало доказательств в пользу профилактического применения препаратов, содержащих тромбоциты, собакам с IMT. Проведенные до настоящего времени исследования, посвященные этой проблеме, не выявили положительного эффекта у собак, получавших обогащенную тромбоцитами плазму или свежую цельную кровь. Перелитые тромбоциты быстро расходуются или разрушаются циркулирующими антитромбоцитарными антителами. Однако могут наблюдаться значительные временные увеличения, и, как и у людей, они оправдывают переливание тромбоцитов, когда собакам с IMT требуется хирургическое вмешательство или когда возникает тяжелое, опасное для жизни кровотечение. Для достижения заметного эффекта обычно требуется несколько единиц концентрата тромбоцитов. Кроме того, по оценкам, 30% собак с IMT нуждаются в переливании большого количества эритроцитарной массы для устранения острой кровопотери.
Ритуксимаб, моноклональное антитело, которое воздействует на антиген CD20 на В-клетках, успешно применяется у людей для лечения лимфомы, а также IMT. Цель этого и других антител, которые были оценены для лечения IMT у человека, - нарушить иммунную регуляцию, приводящую к выработке аутоантител. Однако моноклональные антитела к CD20 человека, по-видимому, не связываются с В-клетками собак. Поскольку появляется все больше свидетельств того, что выработка тромбоцитов может быть нарушена при IMT, лечение, стимулирующее мегакариопоэз, также может оказаться полезным. Ромиплостим (Amgen Inc., Таузенд Оукс, Калифорния), лиганд рецепторов тромбопоэтина, недавно получил одобрение для лечения хронической IMT у людей. В ходе клинического исследования 3-й фазы 87% пациентов, получавших ромиплостим, смогли прекратить или уменьшить сопутствующую терапию, по сравнению с 38% в группе плацебо. 38 В ходе доклинической разработки Ромиплостим изучался на мышах, крысах, кроликах, собаках и обезьянах, и сообщалось, что он повышает концентрацию тромбоцитов у большинства исследованных видов животных.

A. Тромбоцитоз — это [количество тромбоцитов], превышающее допустимый верхний предел нормы, хотя в некоторых отчетах о тромбоцитозе концентрация, используемая для определения тромбоцитоза, несколько превышает верхний предел нормы. Тромбоцитоз может быть результатом перераспределения или повышенной продукции тромбоцитов. Повышенная продукция может быть связана с гемическими новообразованиями, затрагивающими мегакариоциты, или может возникать как вторичная реакция на другие состояния. Семейные тромбоцитозы, в том числе вызванные мутациями рецептора тропонина, встречаются у людей, но не были зарегистрированы у домашних млекопитающих. Тем не менее, могут быть значительные породные различия в концентрации тромбоцитов, поэтому сравнение с исторической концентрацией тромбоцитов у особи может быть полезным в дополнение к сравнению с обычным породонеспецифическим референтным интервалом.
B. Соответствующие референтные интервалы для [тромбоцитов] могут быть смещены вверх для людей, живущих на большой высоте.
С. Уровень [K+] в сыворотке может повыситься in vitro (тип псевдогиперкалиемии) из-за увеличения количества тромбоцитарного K+, высвобождаемого во время свертывания крови.

A. Псевдотромбоцитоз (ложный тромбоцитоз) или ложное увеличение количества [тромбоцитов] может возникать при наличии аномальной популяции частиц с характеристиками размера и разброса тромбоцитов. Исследование мазка крови может подтвердить тромбоцитоз и помочь исключить причины псевдотромбоцитоза.
1. Остаточные эритроциты в результате внутрисосудистого гемолиза (например, IMHA (ИОГА), лизис эритроцитов in vitro в старых образцах) могут быть обнаружены как тромбоциты; инструментальные диаграммы рассеяния тромбоцитов или различия между импедансной и оптической концентрациями тромбоцитов могут позволить распознать такие помехи. Анализ мазка крови может подтвердить наличие призрачных клеток, если только они не образуются в анализаторе.
2. Микроцитарные эритроциты или потенциально выраженная фрагментация эритроцитов могут вызывать псевдотромбоцитоз. Маловероятно, что цитоплазматических фрагментов лейкозных клеток будет достаточно много, чтобы вызвать тромбоцитоз, но количество [тромбоцитов] может быть ложно увеличено из-за них.
3. Другие частицы, включая определенные липиды, также могут вызывать искусственный тромбоцитоз, если они присутствуют в достаточно высокой концентрации.

B. Реактивный тромбоцитоз (вторичный, неклональный): Реактивный тромбоцитоз возникает вторично по отношению к одному или нескольким другим заболеваниям и не связан с неоплазией мегакариоцитов. Основная причина часто остается неясной из-за сопутствующих факторов, например, воспаления и медикаментозной терапии, связанных с новообразованием, что делает неясным, связан ли тромбоцитоз с новообразованием, связанным с ним воспалением, лечением или их сочетанием. Кроме того, в обзорных исследованиях тромбоцитоза в большинстве случаев нельзя было исключить преходящий физиологический тромбоцитоз, поскольку данные были получены из единичных ОАК. Стойкий тромбоцитоз является неспецифическим показателем для оценки основного заболевания, но степень тромбоцитоза не помогает предсказать причину.
1. Перераспределение: Умеренный и преходящий физиологический тромбоцитоз, даже с поправкой на концентрацию гемоглобина, может возникать у некоторых видов животных (например, у собак, кошек и людей) при интенсивных физических нагрузках или выбросе адреналина. У людей тромбоцитоз, по-видимому, возникает в основном в результате высвобождения тромбоцитов из селезенки, но физические нагрузки могут вызывать тромбоцитоз у пациентов с аспленией. Также имеются данные о перераспределении тромбоцитов из легких. Фенилэфрин, который вводили лошадям для того, чтобы вызвать эритроцитоз, не вызывал сопутствующего тромбоцитоза.

2. Увеличение производства
а) Воспаление: Воспалительные цитокины, включая IL-6, стимулируют выработку тромбопоэтина гепатоцитами и, таким образом, усиливают тромбопоэз при широком спектре инфекционных и неинфекционных воспалительных состояний, включая хирургические и нехирургические травмы у людей. Это может привести к тому, что уровень [тромбоцитов] в плазме крови будет выше, чем ожидалось. Инфекционные и неинфекционные (например, иммуноопосредованные) воспалительные заболевания являются одной из наиболее распространенных категорий нарушений, связанных с тромбоцитозом у домашних млекопитающих.
б. Злокачественные новообразования: Тромбоцитоз может быть результатом сопутствующего воспаления или продукции тромбопоэтических цитокинов (например, IL-6, Tpo) опухолевыми клетками. Различные карциномы, лимфомы и новообразования из тучных клеток чаще всего ассоциируются с тромбоцитозом у собак, но тромбоцитоз встречается у собак при многих типах новообразований. О кошках информации меньше.
c. Дефицит железа: Тромбоцитоз является распространенным, но противоречивым заболеванием у собак и людей с дефицитом железа. Концентрация тромбопоэтических цитокинов в крови (например, IL-6, гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора или Тпо) не была повышена у пациентов с дефицитом железа и тромбоцитозом, и данные не подтверждают перекрестный эффект Эпо. Напротив, исследования на мышах подтверждают, что низкая концентрация железа в костном мозге изменяет метаболизм предшественников эритроидов/мегакариоцитов (ErMegPr на рисунке 2.1) и способствует их приверженности линии мегакариоцитов в ущерб линии эритроидов. Повышенная пропускная способность мегакариоцитов связана с увеличением плоидности и увеличением выработки пропластоцитов.
d. Алкалоиды барвинка: винкристин и винбластин стимулируют тромбопоэз, что может привести к тромбоцитозу без увеличения MPV (средний объем тромбоцитов). У пациентов с IMT эти препараты могут также способствовать повышению концентрации тромбоцитов, уменьшая их разрушение за счет ингибирования MPS (системы мононуклеарных фагоцитов).
e. Восстановление после тромбоцитопении (обратный тромбоцитоз): Тромбоцитопения может стимулировать тромбопоэз в такой степени, что его выработка превышает потребление или разрушение, а концентрация в крови временно превышает верхний контрольный предел во время восстановления. Это может произойти после отмены миелосупрессии, при восстановлении после IMT или после кровопотери.
f.  После спленэктомии: Спленэктомия вызывает тромбоцитоз, иногда выраженный, связанный с усилением тромбопоэза и повышением концентрации тромбопоэтина в крови. Тромбоцитоз является преходящим, но может сохраняться в течение нескольких недель. Другие механизмы, которые могут способствовать тромбоцитозу, включают уменьшение разрушения тромбоцитов (увеличение продолжительности жизни), уменьшение секвестрации или восстановление тромбопоэза, если на момент спленэктомии наблюдалась чахоточная или деструктивная тромбоцитопения.
g. Кровопотеря, особенно хроническая, связана с тромбоцитозом у нескольких видов животных, но во многих из этих случаев специфическими причинами или факторами, способствующими тромбоцитозу, могут быть дефицит железа, воспаление, рикошетный тромбоцитоз или новообразования. Тромбоцитоз, связанный с кровопотерей, может быть связан с наличием селезенки; он наблюдался при повторных флеботомиях (хроническая кровопотеря) у неспленэктомированных кроликов, которым вводили железо, но не наблюдался у кроликов, которым вводили железо и которые прошли спленэктомию.
h. Гиперкортизолемия: Гиперадренокортицизм и экзогенные глюкокортикоиды были связаны с тромбоцитозом у собак, но причинно-следственная связь не ясна. Тромбоцитоз может быть связан с основными или сопутствующими заболеваниями, такими как воспалительные заболевания или неоплазия. Введение преднизолона здоровым собакам не приводило к повышению концентрации тромбоцитов или вызывало сомнения в этом. В неопубликованном исследовании влияния иммуносупрессивной дозы (2 мг/кг) преднизолона на функцию тромбоцитов у собак (MAS), преднизолон, который ежедневно давали шести собакам в течение 21 дня, не оказал заметного или устойчивого воздействия на [тромбоциты] и не увеличил их по сравнению с двумя контрольными собаками.
i. Голодание: Тромбоцитоз является распространенным и, вероятно, многофакторным заболеванием у голодающих собак.
j.У собак и кошек с тромбоцитозом наблюдались и другие нарушения, но взаимосвязи и возможные причины менее ясны. К ним относятся заболевания почек, сердца и сахарный диабет у собак, а также гипертиреоз.

C. Гемические новообразования (клональный тромбоцитоз)
1. Первичная (эссенциальная) тромбоцитемия (см. также главу 6): Это редкое хроническое миелопролиферативное новообразование, о котором сообщалось у нескольких собак и кошек. Концентрация тромбоцитов постоянно и заметно повышалась (1 000 000-5 000 000/мкл) (рис. 4.3,В). Могут присутствовать плеоморфные крупные и/или гипогранулярные тромбоциты, похожие на те, что наблюдаются при некоторых мегакариоцитарных лейкозах (рис. 4.6). PDW (Ширина распределения тромбоцитов) может быть увеличена. В костном мозге содержится повышенное количество зрелых мегакариоцитов (мегакариоцитарная неоплазия, а не гиперплазия), и мегакариоциты могут иметь атипичные признаки.
а) Состояние человека связано с клональной пролиферацией плюрипотентных стволовых клеток. Диагностика у домашних млекопитающих в настоящее время проводится путем исключения других причин персистирующего тромбоцитоза, хотя у людей с эссенциальной тромбоцитемией можно провести оценку мутаций в генах, которые чаще всего поражаются: JAK2, CALR и MPL.
б. Отсутствуют данные о распространенности тромботических или геморрагических осложнений у домашних млекопитающих с клональным тромбоцитозом.
2. Другие хронические миелопролиферативные новообразования: истинная полицитемия, первичный эритроцитоз и хронический миелоидный лейкоз.
3. Редко сообщалось об остром мегакариобластном лейкозе (подтип острого миелоидного лейкоза M7) у собак и кошек (рис. 4.6). Может наблюдаться тромбоцитоз или тромбоцитопения. При этом миелоидном лейкозе, в отличие от эссенциальной тромбоцитемии, более 20 % ядросодержащих клеток в костном мозге являются мегакариобластами, при этом более 50 % ядросодержащих клеток имеют мегакариоцитарный фенотип (критерии Всемирной организации здравоохранения); может наблюдаться фиброз костного мозга и неопластические мегакариобласты могут присутствовать в крови и других органах.
4. Другие миелоидные новообразования, такие как миелодиспластический синдром/миелопролиферативные новообразования, иногда ассоциируются с тромбоцитозом.

Патологический тромбоз отражает дисбаланс между фибринообразованием и фибринолизом, возникающий в результате дисфункции антикоагулянтных или фибринолитических путей и/или подавляющего избытка прокоагулянтных стимуляторов (см. главы 87 и 88). У людей были выявлены многочисленные наследственные тромботические синдромы, или “тромбофилии”. Среди наиболее хорошо изученных - лейденский фактор V (дефект, который делает фактор V нечувствительным к инактивации протеина С) и дефицит антикоагулянтных белков, антитромбина (АТ) и протеина С. На сегодняшний день наследственные тромбофилии не были выявлены в отечественной практике.

Тромбоз признан распространенным осложнением многих распространенных заболеваний у животных. Наблюдательные исследования включают иммуноопосредованную гемолитическую анемию (IMHA), гиперадренокортицизм, заболевания сердца, а также неопластические нарушения и нарушения с потерей белка в качестве первичных патологических состояний, часто ассоциируемых с системным тромбозом и тромбоэмболией легочной артерии (ПТЭ). Хотя часто описываются нарушения гемостаза, конкретные факторы, вызывающие тромбоз у животных с такими состояниями, остаются недостаточно определенными. Независимо от лежащих в основе тромбоза механизмов, он увеличивает заболеваемость и смертность по сравнению с первичным заболеванием и часто заставляет задуматься о проведении антитромботической терапии.

Аспирин

Аспирин является наиболее используемым и изученным антитромбоцитарным средством. Это непрямое средство, которое ингибирует вторичную агрегацию тромбоцитов путем необратимого ацетилирования циклооксигеназы тромбоцитов (ЦОГ), тем самым предотвращая образование агониста тромбоцитов тромбоксана А2. Аспирин также подавляет активность ЦОГ в эндотелиальных клетках, что приводит к снижению синтеза простациклина и потере антиагрегантных и сосудорасширяющих свойств. В отличие от тромбоцитов, ингибирование ЦОГ в эндотелиальных клетках обратимо, и поэтому антитромботические состояния преобладают в участках интактного эндотелия. Профилактическое действие аспирина при артериальном тромбозе у людей подтверждается крупными метаанализами, демонстрирующими снижение смертности, инфаркта миокарда и инсульта вследствие коронарных синдромов. Однако аспирин относительно неэффективен для первичной или вторичной профилактики кардиогенной эмболии (КЭ) у пациентов с протромботическими состояниями, такими как фибрилляция предсердий. Фармакологические, обезболивающие и антитромбоцитарные эффекты аспирина хорошо изучены у собак и кошек. Аспирин применяется у кошек уже более 30 лет с целью предотвращения развития КЭ; однако ретроспективные исследования показывают, что частота рецидивов КЭ составляет от 17% до 75%. Побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта (например, анорексия и рвота) часто наблюдаются у кошек, получающих аспирин, но могут быть устранены при приеме низких доз (5 мг на кошку каждые 72 часа). Хотя в немногих клинических отчетах описывается антитромботическая терапия аспирином у собак, ретроспективное исследование IMHA связывает улучшение клинических результатов с добавление низких доз аспирина к иммуносупрессивным препаратам терапия. Здоровых собак получали аспирин равномерно развиваются гастродуоденальные эрозии и подслизистые кровоизлияния, однако клинические признаки встречаются редко.

ДОЗИРОВКА
Для собак: дозы не указаны, и идеальные дозы неизвестны. • Снижение агрегации тромбоцитов (например, IMHA): 0,5–1 мг/кг каждые 24 часа или 0,5 мг/кг каждые 12 часов. • Обезболивание, повышение температуры тела, воспаление: 10-20 мг/кг ежедневно в течение 12 часов; безопасность и эффективность этой дозы не установлены.
Кошки: Снижение агрегации тромбоцитов: 18,75 мг/кошку внутрь 3 дня в неделю (низкая доза) или 75 мг/кошку внутрь 3 дня в неделю (высокая доза); эта доза может быть связана с более высоким риском побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта. Некоторые авторы рекомендуют очень низкую дозу (0,5 мг/кг в сутки). q24h) для ингибирования ЦОГ в тромбоцитах без предотвращения положительного эффекта выработки простациклина. Безопасность и эффективность этих доз не оценивались в клинических или экспериментальных исследованиях.

Тиенопиридины

Тиенопиридины индуцируют специфический и необратимый антагонизм рецептора ADP P2Y12 на мембране тромбоцитов. Эти препараты более эффективны, чем аспирин, и классифицируются как прямые антитромбоцитарные средства, ингибирующие как первичную, так и вторичную агрегацию тромбоцитов в ответ на действие нескольких агонистов. Исходные соединения должны подвергаться биотрансформации в печени с образованием активных метаболитов. Ингибирование рецептора ADP P2Y12 активными соединениями снижает высвобождение тромбоцитами серотонина, АДФ и тромбоксана, тем самым ингибируя индуцированное АДФ изменение конформации тромбоцитарного гликопротеина IIb/IIIa и снижая связывание фибриногена и VWF. Также происходит модуляция вазоконстрикции, опосредованной тромбоцитами.

Тиклопидин (Ticlid®) – это тиенопиридин первого поколения с отсроченным, на 4-6 дней, началом действия. Несмотря на доказанную эффективность препарата у людей, его применение ограничено такими побочными эффектами, как желудочно-кишечные и дерматологические расстройства, кровотечения, агранулоцитоз, изменение печеночных проб и тромботическая тромбоцитопеническая пурпура (ТТП).
Фармакодинамическое исследование на здоровых кошках продемонстрировало устойчивый антитромбоцитарный эффект тиклопидина в высоких дозах, однако побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта препятствовали его клиническому применению. Аналогичные побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта были обнаружены у собак, зараженных сердечными червями, получавших тиклопидин.

Клопидогрель Клопидогрель (Плавикс®) — тиенопиридин второго поколения, вытеснивший тиклопидин из-за равной или лучшей клинической эффективности и более благоприятного профиля безопасности. Максимальное антиагрегантное действие клопидогреля достигается через 3–5 дней ежедневного приема, а его действие ослабевает через 5–7 дней после прекращения приема. Побочные эффекты клопидогреля у людей включают диарею, кожную сыпь, иногда небольшие кровотечения и возможный риск ТТП. Крупные клинические испытания показывают, что клопидогрель значительно снижает риск инсульта, инфаркта миокарда и сосудистой смерти по сравнению с аспирином.
В фармакодинамическом исследовании на здоровых кошках клопидогрел вызывал 95%-ное ингибирование агрегации тромбоцитов в ответ на АДФ, 92%-ное ингибирование высвобождения серотонина и в 3,9 раза увеличивал время кровотечения из слизистой оболочки. Хотя в этом исследовании не было отмечено побочных эффектов, в отдельных сообщениях описывается рвота у некоторых кошек, которая возникает в ответ на введение препарата в гелевых капсулах или с кормом. На сегодняшний день нет данных о развитии ТТП у кошек, получавших клопидогрель. Применение клопидогреля улучшило коллатеральное кровообращение и неврологические функции в кошачьей модели инфаркта аорты. В настоящее время проводится рандомизированное контролируемое исследование "Артериальная тромбоэмболия у кошек: клопидогрель против аспирина" (FAT CAT; http://www.vin.com/fatcat/ ), целью которого является оценка клинической эффективности препарата при КЭ у кошек. Фармакодинамика клопидогрела у собак была изучена, но клинические испытания препарата не проводились.

ДОЗИРОВКА Собаки: 1,1–4 мг/кг перорально каждые 24 часа. Однократная ударная доза 4–10 мг/кг перорально может помочь быстрее достичь терапевтической концентрации. Кошки: 18,75 мг/кошку перорально каждые 24 часа. Однократная ударная доза 37,5 мг перорально может помочь быстрее достичь терапевтической концентрации. (BSAVA)

Нефракционированный гепарин

Нефракционированный гепарин (НГ) получают из кишечника свиньи или легкого крупного рогатого скота и состоит из гетерогенных молекул со средней молекулярной массой приблизительно 15 000 Да (диапазон 3000-30 000 Да). 20 Такая неоднородность приводит к высокой вариабельности фармакокинетических и антикоагулянтных свойств. Молекулы гепарина содержат пентасахаридную последовательность, которая связывается с AT, тем самым способствуя ингибированию AT факторов IIa (тромбина), Xa и IXa и уменьшая активацию факторов V и VIII, катализируемую тромбином. Наиболее распространенным побочным эффектом терапии УГ является кровотечение; однако тяжелый тромботический синдром гепарин-индуцированной тромбоцитопении (ГИТ) развивается примерно у 10% людей, получающих амбулаторное лечение. UH доказал свою эффективность у людей для профилактики или лечения венозного тромбоза, ПТЭ, острого коронарного синдрома, кардиохирургических и сердечно-сосудистых вмешательств.
Нефракционированный гепарин использовался при лечении многих ветеринарных заболеваний, включая ДВС-синдром, ИГА, легочную тромбоэмболию и артериальную тромбоэмболию. Схемы лечения, как правило, эмпирические или экстраполируются из литературы по лечению человека. В связи с высокой вариабельностью фармакокинетики гепарина, терапия гепарином с высокой чувствительностью к гепарину требует индивидуального наблюдения за пациентами. Для мониторинга гепарина с высокой вариабельностью фармакокинетики обычно используется активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), с терапевтической целью продления периода гепарина до 1,5–2 раз выше исходного значения. Помимо АЧТВ, мониторинг гепарина с высокой чувствительностью к фактору Ха может быть основан на измерении ингибирующей активности фактора Ха (анализы на анти-Ха).

Низкомолекулярные гепарины

Низкомолекулярные гепарины (НМГ) меньше по размеру, чем НГ (4000–5000 Да), но сохраняют пентасахаридную последовательность, которая связывается с АТ (антитромбином). НМГ ингибируют фактор IIa в гораздо меньшей степени, чем фактор Ха. Из-за меньшего размера НМГ также имеют более высокую биодоступность и более длительный период полувыведения из плазмы, чем НГ (Нефракционированный гепарин). В терапевтических концентрациях НМГ не продлевают АЧТВ; поэтому анализы анти-Ха используются для мониторинга клинических исследований. Пиковые уровни анти-Ха у людей наблюдаются через 3–5 часов после подкожной инъекции, со снижением до неопределяемых уровней через 8 часов. Хотя активность анти-Ха не коррелирует напрямую с антикоагулянтным эффектом in vivo, положительные клинические исходы были связаны с пиковой активностью НМГ анти-Ха 0,5–1,0 Ед/мл. Для клинического применения НМГ обычно вводят в фиксированной дозе без лабораторного контроля. Многочисленные испытания на людях продемонстрировали, что НМГ дают эквивалентные или улучшенные результаты по сравнению с НГ при нестабильной стенокардии, инфаркте миокарда, венозном тромбозе и легочной тромбоэмболии. Кровотечение является наиболее частым побочным эффектом НМГ, с зарегистрированной частотой до 27% (небольшие кровотечения) и до 6% (большие кровотечения).
НМГ вызвали значительный интерес в ветеринарии. Фармакокинетические исследования дальтепарина (100 ЕД/кг) и эноксапарина (1 мг/кг), вводимых подкожно здоровым кошкам, демонстрируют достижение пиковой анти-Ха активности к 4 часам, со снижением до неопределяемых уровней к 8 часам. 1 В фармакодинамическом исследовании на кошках с использованием модели венозного застоя эноксапарин (1 мг/кг каждые 12 часов) вызывал 91,4% ингибирование тромба через 12 часов после введения препарата, при отсутствии измеримой анти-Ха активности. Этот режим дозирования может обеспечить терапевтические уровни антикоагулянта; однако, для подтверждения его эффективности необходимы клинические испытания. Ретроспективные исследования терапии дальтепарином в различных дозировках у кошек для вторичной профилактики КЭ (кардиогенной эмболии) показали сопоставимое время выживания с кошками, получавшими варфарин, и относительно небольшое количество побочных эффектов. Фармакокинетика эноксапарина и дальтепарина также изучалась на здоровых собаках; однако клинические испытания пока не определили эффективные режимы дозирования.

Фраксипарин

Варфарин

Варфарин блокирует переработку витамина К, что приводит к выработке дисфункциональных витамин-К -зависимых факторов свертывания крови (факторов II, VII, IX и X) и антикоагулянтных белков С и S. Варфарин остается стандартным пероральным препаратом для тромбопрофилактики различных заболеваний человека, включая венозный тромбоз, фибрилляцию предсердий и протезирование сердечных клапанов. Кровотечение является наиболее распространенным осложнением, частота серьезных кровотечений составляет примерно 1-2%, а при незначительных кровотечениях – до 20%. На метаболизм варфарина влияют генетические факторы и лекарственные взаимодействия, которые могут усиливать или ослаблять его антикоагулянтный эффект. Лечение варфарином корректируется путем преобразования результатов ПТ-анализа в значения международного нормализованного отношения (МНО). INR позволяет проводить стандартизацию среди испытательных лабораторий и выводится из следующего уравнения: [(PT пациента/контрольная PT) ISI ], где ISI - это показатель чувствительности реагента к PT. Хотя клинические испытания, основанные на определении дозы для достижения целевого МНО, на животных не проводились, значения МНО 2-3 связаны с эффективной профилактикой тромбоза у людей и рекомендуются для большинства случаев.
Фармакокинетика и фармакодинамика варфарина были изучены на собаках и кошках. Рекомендуемое для людей увеличение дозы варфарина в 1,3 – 1,6 раза от исходного уровня или МНО в 2-3 раза являются эмпирическими терапевтическими целями для антикоагулянтов у животных. Ретроспективные исследования применения варфарина для вторичной профилактики КЭ (кардиогенной эмболией) у кошек показали, что частота рецидивов составляет 40-50%, при этом наиболее распространенным осложнением является кровотечение (в том числе с летальным исходом). Владельцы должны быть проинформированы о рисках, затратах и самоотдаче, необходимых для проведения терапии варфарином у животных.

Синтетические ингибиторы Ха

Синтетические ингибиторы Ха - это новый класс лекарственных средств, предназначенных для избирательного ингибирования фактора Ха за счет усиления действия АТ (антитромбина). Эти препараты представляют собой гомогенные препараты пентасахаридных соединений, которые связываются исключительно с АТ. Эти препараты также обладают полной биодоступностью при подкожном введении, демонстрируют меньшую вариабельность и не вызывают HIT (гепарин индуцированная тромбоцитопения). Мониторинг лекарственных средств основан на измерении ингибирования FXa в тестах на анти- Ха активность. Наиболее распространенным побочным эффектом является кровотечение, возникающее с той же частотой, что и НМГ.

Фондапаринукс
Фондапаринукс (Arixtra®) в настоящее время разрешен к применению в медицине. Препарат усиливает анти- Ха-активность AT примерно в 300 раз, период полувыведения составляет 17-21 час и назначается с интервалом в 24 часа. Пациентам с почечной недостаточностью требуется тщательное наблюдение, поскольку он выводится с мочой в неизмененном виде. Многочисленные клинические испытания продемонстрировали эквивалентность или превосходство фондапаринукса по сравнению с НМГ, эноксапарином, для тромбопрофилактики у пациентов, перенесших операцию по замене тазобедренного или коленного сустава, или для лечения тромбоза глубоких вен или PTE (ТЭЛА). Фармакокинетическое исследование фондапаринукса на кошках показало, что дозировка 0,06 мг/кг подкожно каждые 12 часов приводит к максимальным и минимальным значениям анти-Ха, которые приближаются к терапевтическим уровням для человека (Хоган Д.Ф., неопубликованные данные).

Идрапаринукс
Идрапаринукс - это синтетический пентасахарид второго поколения, разработанный для замены варфарина в долгосрочной тромбопрофилактике. Идрапаринукс с высокой степенью связывания с АТ, что приводит к периоду полувыведения из плазмы крови, эквивалентному периоду полувыведения АТ (80 часов).  Предварительные исследования показывают, что идрапаринукс, как правило, так же эффективен, как и варфарин, у пациентов с венозным тромбозом и фибрилляцией предсердий; однако его применение связано с более высокой частотой аномальных кровотечений. Повышенный риск кровотечения и отсутствие специфического антидота замедлили дальнейшую разработку идрапаринукса для клинического применения.

Фибринолитические препараты

Сверхфизиологические уровни активаторов плазминогена вводятся внутривенно, чтобы вызвать растворение тромба у пациентов с венозным тромбозом, PTE (ТЭЛА), системной артериальной окклюзией, ишемическим инсультом и острым инфарктом миокарда. Наиболее распространенным осложнением тромболизисной терапии у людей является кровотечение, которое может быть вызвано тромбоцитопенией, дисфункцией тромбоцитов, гипофибриногенемией, системным фибринолизом или разрушением сгустка. Реперфузионное повреждение - еще одно осложнение, возникающее при высвобождении метаболических отходов и электролитов из пораженных инфарктом тканей. Синдром Лериша относится к ишемии мышц тазовых конечностей, вызванной инфарктом дистального отдела аорты. Тромболитическая терапия у таких пациентов часто вызывает тяжелый метаболический ацидоз и гиперкалиемию. Аналогичное состояние развивается у кошек с кардиогенной эмболией синдромом после тромболитической терапии. Из многих тромболитических средств, разрешенных к применению у людей, ветеринарные отчеты ограничены т- РА, урокиназой и стрептокиназой.

Тканевой активатор плазминогена

Плазминоген и тканевой активатор плазминогена (t-PA) обладают высоким сродством к фибрину, а t-PA взаимодействует преимущественно со связанным с фибрином, а не со свободным плазменным плазминогеном. Однако специфичность t-PA к фибрину относительна, и в высоких дозах он вызывает системное протеолитическое состояние и кровотечение. Отдельные сообщения о собаках с артериальной тромбоэмболией или тромбозом нижней полой вены, которым вводили болюсный человеческий рекомбинантный t-PA (Activase®), описывают вариабельный ответ и геморрагические осложнения. Клиническое исследование терапии t-PA у шести кошек с кардиогенной эмболией показало острую выживаемость 50%, при этом летальные исходы были обусловлены реперфузионным повреждением и кардиогенным шоком. У выживших перфузия восстановилась в течение 36 часов, а двигательная функция вернулась в течение 48 часов.

Стрептокиназа

Стрептокиназа считается «неспецифическим» активатором плазминогена, поскольку она превращает как циркулирующий, так и связанный с фибрином плазминоген в активный фермент плазмин. Системная плазминемия может предрасполагать к кровотечению из-за деградации и потери фибриногена и факторов свертывания, а также ингибирующего действия продуктов распада фибрина. Стрептокиназа — это иммуногенный белок, который может вызывать аллергические реакции и снижение эффективности препарата, особенно при повторном введении. Стрептокиназу редко назначают людям с интервалом менее 4 лет. Стрептокиназу (Streptase®) вводили собакам и кошкам внутривенно в дозе 90 000 МЕ (в/в) в течение 1 часа, затем по 45 000 МЕ/час в течение до 12 часов. В двух ретроспективных исследованиях терапии стрептокиназой у кошек с энцефалопатией и инфарктом аорты наблюдались серьезные осложнения, включая острый респираторный дистресс-синдром, кровотечение, реперфузионное повреждение и показатели смертности 100% и 67% соответственно. 31 Напротив, терапия стрептокиназой при тромбоэмболических заболеваниях, по-видимому, хорошо переносится собаками. В серии случаев из четырех собак у трех наблюдалось полное разрешение тромба, и у всех наблюдалось частичное или полное разрешение симптомов лишь с редкими небольшими кровотечениями.

Урокиназа
Урокиназа (uPA) — это сериновая протеаза, активатор плазминогена. Ее активная форма с низкой молекулярной массой связывается с высокой аффинностью с лизин-плазминогеновой формой плазминогена, которая преимущественно накапливается в тромбах. Это свойство придает uPA некоторую фибрин-специфичность. Урокиназа (Abbokinase®) используется клинически в качестве тромболитического средства у людей с венозным тромбозом, легочной тромбоэмболией и сердечными синдромами. Препарат вводился кошкам и собакам с артериальной тромбоэмболией по протоколу: ударная доза 4400 МЕ/кг в течение 10 минут, затем 4400 МЕ/кг/ч в течение 12 часов. В небольшой серии случаев кошек с хронической тромбоэмболией uPA в целом хорошо переносился, и примерно у половины кошек восстановилась некоторая часть двигательной функции, и в конечном итоге они выжили. Напротив, ни одна из четырех собак, получавших uPA, не выжила.

Наиважнейшей терапевтической целью является искоренение лейкозных клеток и восстановление нормального кроветворения. В настоящее время это наилучшим образом достигается с помощью циторедуктивной химиотерапии, а наиболее часто используемые агенты включают комбинации антрациклинов, таких как доксорубицин, циклофосфамид, винкристин, 6-тиогуанин и преднизон. У собак использовался цитозина арабинозид (Ara-C) в дозе 100–200 мг/м², вводимый путем медленной инфузии (12–24 часа) ежедневно в течение 3 дней и повторяемый еженедельно, а также несколько других вариантов с использованием подкожных инъекций Ara-C. Также использовались несколько вариантов протоколов, основанных на CHOP или COP, с Ara-C или без него. Общий прогноз при имеющемся в настоящее время лечении неблагоприятный. Хотя показатели ответа на многокомпонентные протоколы относительно высоки (50–70%), ответы непродолжительны, и среднее время выздоровления, несмотря на агрессивные протоколы, обычно составляет от 0,5 до 2,0 месяцев. Очевидно, что эффективные методы лечения ОМЛ (острого миелоидного лейкоза) у собак требуют дальнейшего изучения.